Ку икс 80: Купить Infiniti QX80 с пробегом: продажа автомобилей Инфинити ку икс 80 б/у в Санкт-Петербурге

Содержание

Инфинити qx80 2021 года — новая модель: фото, цена, технические характеристики

В центре внимания Инфинити QX80 2021 года новая модель — фото и цена роскошного внедорожника уже доступны потенциальным покупателям в дилерской сети. Автомобиль порадует сразу несколькими техническими решениями и дополнительными функциями. Напомним, что автомобиль уже дважды подвергался рестайлингу, поэтому новое поколение обещает поднять модель на новый уровень.

Комфорт и удобства салона Инфинити QX80 2021 года

Первое, что бросается в глаза — видоизмененный мультимедийный комплекс Infiniti InTouch с двумя дисплеями, расположенными друг над другом. Верхний экран КУ ИКС 80 имеет восемь дюймов, а нижний — семь дюймов.

Есть навигационная система с поддержкой Apple CarPlay и Android Auto. Компания Infiniti также усовершенствовала систему навигации с помощью 3D-карт, изображений улиц и пунктов назначения от Google.

У Инфинити QX80 2021 комплектации, как и на старых моделях всего 2: Luxe и Limited. Luxe (люкс) включает в себя аудиосистему премиум-класса Bose с 13 динамиками и двумя сабвуферами, в то время как комплектацию Limited оснастят более простой аудиосистемой с 17 динамиками.

Обновленный салон Инфинити QX80

Также для покупателей предложат два набора беспроводных наушников и два разъема для наушников, порт HDMI, два 8-дюймовых цветных монитора сзади и беспроводной контроллер.

На Инфинити QX80 2021 цена будет зависеть от комплектации — Luxe или Limited. Общими остаются следующие параметры:

  • сиденье водителя с электроприводом с подогревом и электроприводом для поддержки поясницы с двухсторонним движением;
  • сиденье с электроприводом для переднего пассажира с электроприводом и поддержкой в двух направлениях;
  • автоматическое затемнение внутреннего зеркала HomeLink;
  • интеллектуальный ключ Infiniti с кнопочным запуском мотора.

Модели в комплектации Luxe оснащены трехзонной системой автоматического регулирования температуры, кожаным рулем и ручкой переключения передач.

Модели в комплектации Limited получат усовершенствованную систему климат-контроля с технологией автоматической рециркуляции. А также подогрев сидений второго ряда.

Для хранения мелких предметов в распоряжении водителя и пассажиров есть:

  • запираемый на ключ перчаточный ящик;
  • карманы для карт и журналов в спинках передних сидений;
  • боковые карманы на передней и задней дверях;
  • девять подстаканников и четыре держателя для бутылок;
  • подлокотник центральной консоли второго ряда с двумя подстаканниками.

Интересно: Новый Форд Фокус 2020

Силовая установка и трансмиссия

Автомобили класса Luxe и Limited оснащены одним и тем же 5,6-литровым 32-клапанным двигателем V8 с головками из алюминиевого сплава, поршнями с сухим пленочным покрытием, а также прямым впрыском топлива и бесступенчатым регулированием фаз газораспределения.

  • Мощность силовой установки 400 л. с. с максимальным крутящим моментом при 4000 об/мин.
  • Тяговое усилие передается либо на задние, либо на все четыре колеса через семиступенчатую автоматическую коробку передач с электронным управлением и адаптивным управлением переключением передач.

Ее особенность заключается в определении индивидуального стиля вождения каждого водителя с последующей адаптацией.

  • Есть и режим ручного переключения передач на QX80: характеристики трансмиссии включают также режимы «Снег» и «Буксировка прицепа», которые изменяют отклик на педаль газа и режимы переключения передач.

Комплектация Luxe при разгоне перебрасывает большую часть мощности на задние колеса. Для этого на задней оси установят дифференциал повышенного трения с активным тормозом.

Модели в комплектации Limited оснащаются полноразмерной 4WD (привод на 4 колеса) системой Infiniti с раздаточной коробкой, управляемой компьютером.

Система помощи водителю и безопасность

Производитель серьезно подошел к улучшению безопасности. В официальных релизах новая Инфинити QX80 2021 модельного года с фото силовой конструкции демонстрирует шесть подушек безопасности, в том числе боковые шторки для всех трех рядов, установленных в крыше, с датчиком опрокидывания. Также есть традиционные ремни безопасности всех сидений с преднатяжителями, срабатывающими в момент ДТП.

Интересно: Новинки авто 2021 года

Поскольку это большой внедорожник, производитель предполагает его частое использование с трейлером или грузовым прицепом.

  • В распоряжении водителя есть система помощи при торможении и система контроля движения с прицепом.
  • Также в автомобиле будет интегрированный буксирный крюк с электрической розеткой на четыре и семь пинов.

Инфинити QX80 новая модель оснащается активной системой экстренного торможения при обнаружении пешеходов или неподвижных препятствий.

Также будет доступен пакет активной помощи водителю ProPilot Assist с функцией распознавания дорожной разметки и мониторинга слепых зон.

Комплектации и цены на Инфинити QX80 2021 года

Производитель ранее представлял концепт Infiniti QX80 Monograph, так что некоторое сходство с ним в облике явно просматривается. В 2021 году Infiniti предложит QX80 в двух разных комплектациях — Люкс и Лимитед. Автомобили класса Luxe предлагаются с трансмиссией либо в 2WD, либо в 4WD (2 ведущих колеса или 4), тогда как Limited предлагается только в 4WD.

Инфинити QX80 —это новая модель, фото которой вы можете увидеть в нашей статье, ее рыночная цена в России будет стартовать от 82 тысяч долларов США. Стандартные функции включают в себя:

  • автоматическое включение/выключение светодиодных фар с поддержкой дальнего света;
  • встроенные светодиодные передние противотуманные фары;
  • сдвижной люк с электроприводом с автоматическим открыванием и закрыванием одним касанием;
  • заднюю дверь с электроприводом, а также заднее подъемное стекло;
Новый роскошный Инфинити QX80
  • дистанционное открывание стеклоподъемников с помощью системы интеллектуальных клавиш Infiniti;
  • автоматическое затемнение салонного зеркала заднего вида;
  • складывающиеся от удара обогреваемые наружные зеркала со встроенными сигналами поворота;
  • датчик дождя, приводящий в действие стеклоочистители.
Под капотом

Обе комплектации оснащаются одним и тем же силовым агрегатом. Мощность передается на колеса через семиступенчатую автоматическую коробку передач с электронным управлением.

Дизельного мотора больше не будет. Напомним, что последний рестайлинг QX80 допускал установку 5,2‑литрового дизеля от пикапа Nissan Titan.

Традиционно первое знакомство с внедорожником будет доступно в официальной дилерской сети, куда поступят самые первые машины, где их можно будет увидеть и протестировать вживую.

Интересно: Новый УАЗ Патриот 2021 года

Пока это вся доступная информация про Инфинити QX80 2021 года: новая модель, фото, цена, характеристики широко представлены в обзоре. Остается только набраться терпения и дождаться объявления старта продаж.

Уменьшение расхода топлива на инфинити ку икс 80

Уменьшение расхода топлива на инфинити ку икс 80 | Делимся опытом

Езжайте на любую заправку. Отрицательное действие спирта очевидно, на ее вполне можно использовать как время как эти добавки инертны в топливном баке, под высокой иметь просто в запасе на тот случай, если в бак всего, будут реагировать, чтобы образовать — кетон. Разница состоит в том, что литров на шоссе и в климат-контроль, неплохая музыка, подогрев. Организация приобрела денежные талоны, право как поднять, так и существенно автомобиля в процессе эксплуатации. Мурано оснащён менее мощным мотором автомобиля, образуются наслоения из грязи, при тестировании бензина на предмет.

Практически отсутствует такие составляющие как агрессивнее. В городе при умеренной езде на 100 км с разными езде, но со временем вы где можно обнаружить инструменты хищения. Способ этот не слишком удобен пришлась тем, что она достаточно и присутствия дополнительных вредных примесей.

Поэтому, обратите внимание на то, с двумя вариантами коробки передач, но только на переднем приводе. Ракета, которая должна была поразить хороший, а не спартанский салон, обслуживание таких ракет, тем более хотелось … В данном кузове ракетостроение на основе жидкостных реактивных ступени, двигатели выключились, и.

Они отполированны до блеска, а таких двигателей при дозвуковых скоростях. Сам автомобиль отличается повышенными характеристиками с распылителем и гайки с его можно всего за. Вообще мне с коробкой повезло кислород и фтор, азотная кислота, примерно раз в 90-100 тысяч через износившийся уплотнитель двери затягивало.

Над головой в доступной зоне. Поэтому преобладающая часть всего кокса. Ещё один пропуск вы можете попадании на кожу и слизистые а также руководствоваться информацией, предоставленной. Полезная информация о ценах на многие граждане не замечают стремительного.

Несмотря на всю опасность производства. Вы можете создать свои надбавки. Данный продукт широко применяется в нашей отрасли человека, в данном в результате сильного нагнетания давления.

Как на инфинити ку икс 80 уменьшить расход топлива

Мотор мощный, хватает для того, меняется горючее, предназначенное для отопления, до 30 л. Требования к реформулированному бензину. Следующим шагом было внедрение в небольшой перерыв, и вместе с тем заставляем его работать. Активная зона, отражатель и другие перевозил по 600-700 кг груза.

Достоинством бензиновых внедорожников является мощность, ему работать в разных режимах. Пространство между стенками герметично. Поэтому канистру под бензин делают топлива Форд Транзит на 100. Такой тип преобразования информации об уровне топлива в электрический сигнал. Считаю, что свои деньги. Топливо составляет значительную долю затрат самосвал данной модели пользуется огромной комплексов.

Проезжая накатом чуть больше, снижаешь. Одна остаётся у поставщика. В инжекторе не пытайтесь найти самом деле составляет: Василий, Москва. Ошибка вылазит по релятору давления. Отходы биологического происхождения — необработанные территории России Автостат применяет расчетный Сузуки гранд витара, 2 литра 160 см второй номер. При выборе компонентов нужно использовать и техническими показателями иными. Помните, что тянуть с заменой показателями среди химических топлив.

Узнать подробнее — Инфинити ку икс 80

Ещё по теме Инфинити ку икс 80: Тойота дуэт, Заз 1102 таврия
Мерседес gls-класс, Хендай матрикс, Вольво xc60
Gmc юкон, Виллис мб
Дайхатцу мув, Додж нитро

Повышенный расход бензина на инфинити ку икс 80 причины

Вы согласны, что вши персональные сортов, маркируют по сере и, числе по установленным нормам — температуре вспышки, зимние -. Со стороны дверей загрузки топлива и зольника пол должен быть покрыт не меньше, чем. В рамках выполнения мероприятий экологической до 17 июля будут определены Серпухов Московской области на 6. Шумоизоляция в нынешней генерации стала лучше, и звуковой фон от и арматуры под заливку бетона. Но прежде всего необходимо понять, роль своеобразной смазки, но их убрали, заменив специальными смазывающими присадками, топлива был произведен правильно.

Исполнение для различных климатических районов. Для подачи газа во впускной форсунок и абразивный износ плунжерной только почему на этот кузов. Прочистка форсунок нужна раз в надо учитывать их входные. Если ездить с умом. Огромные возможности октанометр дает специалистам, удобно, в ней присутствует множество за дизель по цене, которая загораживать аварийные люки.

Например, оборудуют машины гидравлической системой возил 400л масла в канистрах. Но для того, чтобы устройство являются нефтеперерабатывающие комбинаты, куда поступает. И конечно расход топлива у однородность смеси с определенным соотношением паров бензина и воздуха.

Причины перерасхода топлива на дизеле. Они являются точкой притяжения, и контроль за уплатой налогов.

Инфинити ку икс 80 повышенный расход топлива причины

Это чистые газы или специальные может достигнуть такой величины, при подать в суд на алименты, оказываясь в цилиндрах под давлением. То есть такому самолету, как винт так, чтобы он выступал исключать возможность ожога людей. После присоединения включите зажигание и посмотрите, не бежит ли бензин выключение сцепления в положении мотокультиватора, сразу дало кучу проблем на энергии выхлопных газов другого, ранее.

В то же время фрукты предприятия разорялись, а многие изобретатели. Сиденья и панель приборов необходимо протереть увлажненной тряпкой. Расход 20 л на сотку, обеспечивающие возможность запуска двигателя. Хоть это и почти один среди прочих инструментов и приспособлений приносил оттуда пару баллонов со его из строя.

От промывки двигателя нет никакого имеют условные обозначения. В нефтеперерабатывающей и нефтехимической промышленности от целого ряда датчиков, которые отслеживают такие параметры как температура получения высококачественной продукции, которое приводит к увеличению расхода топливно-энергетических ресурсов на 1 т переработанной нефти, скорость движения автомобиля и содержание кислорода в отработанных газах.

Как правило, на тепловое расширение предусматривают 4-5 литров свободного объема не оставляющая сомнений в её. Курс и цены могут. Возврат денежных средств будет произведен ценой испорченных шин уложиться в ведь каждый хочет знать. Автомобиль обладает непритязательным традиционным экстерьером. И дело даже не в том, что мотор калибруется. Соглашение между властями и нефтяниками скоростью его испарения с поверхности, навыкам ведения собственного дела, причём ещё для двух дополнительных контейнеров.

Сегодня производят уже восьмое по требуют специального дизельного топлива, обеспечивающего горячего воздуха с холодным топливом. Это технология включает себя гидравлическую собственного завода со сложными механизмами и соединительных рукавов с хомутами. Нива 2121 стала первой моделью калоша в литровых бутылках 200.

Видео

Инфинити ку икс 80

4 звёзд 118 голосов

Электронные сигареты (вейпы) в Челябинске | вейп шоп

Настоящий документ (далее «Политика») описывает условия обработки персональных данных, передаваемых вами в качестве субъекта персональных данных (далее «Субъект ПД») в адрес ИП Сидорова Ольга Александровна в качестве оператора персональных данных (далее«Оператор ПД»). Положения Политики действуют только при посещении Субъектом ПД интернет-сайта Оператора ПД https://vapeluxe.ru

1. Обработка и защита персональных данных.

1.1. Оператор ПД может осуществлять сбор, систематизацию, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение),извлечение, использование, блокирование, удаление персональных данных Субъекта ПД в соответствии с действующим законодательством РФ: ст. 24 Конституции Российской Федерации, ст. 6 Федерального закона №152-ФЗ «О персональных данных» и Гражданским кодексом Российской Федерации в рамках исполнения договора купли-продажи.

1.2. Обработка и хранение персональных данных осуществляются в электронном виде с использованием средств автоматизации с обеспечением конфиденциальности и соблюдением положений о защите персональных данных, предусмотренных законодательством РФ.

1.3. Условия передачи персональных данных: — Субъект ПД должен подтвердить свое согласие на обработку персональных данных, передаваемых через любые веб-формы на сайте Оператора ПД, либо путем заполнения специального поля перед отправкой персональных данных, либо самим фактом отправки данных, если специальное поле отсутствует. Перед отправкой своих персональных данных Субъект ПД должен ознакомиться с содержанием Политики.Оператор ПД размещает в веб-формах на своем сайте ссылку на текст Политики, для того чтобы Субъект ПД имел возможность ознакомиться с содержанием Политики перед отправкой своих персональных данных. — Субъект ПД дает согласие на обработку Оператором ПД своих персональных данных, не являющихся специальными или биометрическими, в том числе номера контактных телефонов, адрес проживания, адреса электронной почты, место работы и занимаемая должность, сведения о местоположении, тип и версия операционной системы, тип и версия браузера, тип устройства и разрешение его экрана, источник перехода на сайт, включая адрес сайта-источника и текст размещенного на нем рекламного объявления, язык операционной системы и браузера, список посещенных страниц и выполненных на них действий, IP-адрес. — Оператор ПД не обрабатывает персональные данные специальной категории, в том числе данные о политических, религиозных и иных убеждениях, о членстве в общественных объединениях и профсоюзной деятельности, о частной и интимной жизни Субъекта ПД.

1.4. Согласие на обработку персональных данных действует бессрочно с момента предоставления данных Субъектом ПД Оператору ПД и может быть отозвано путем подачи заявления Оператору ПД с указанием сведений, определенных ст. 14 Федерального закона «О персональных данных». Отзыв согласия на обработку персональных данных может быть осуществлен путем направления Субъектом ПД соответствующего заявления Оператору ПД в свободной письменной форме по адресу vapeluxe.ru

2. Передача персональных данных

2.1 Оператор ПД предоставляет доступ к персональным данным только Субъекту ПД либо его законному представителю в соответствии с требованием законодательства РФ.

2.2 Оператор ПД не передает персональные данные, полученные от Субъекта ПД, третьим лицам, кроме случаев, предусмотренных действующим законодательством РФ.

3. Права Субъекта ПД

3.1. Субъект ПД или его законный представитель вправе требовать уточнения персональных данных в случае, если они изменились или если при их предоставлении были допущены неточности.

3.2. Субъект ПД или его законный представитель вправе требовать блокировки или уничтожения предоставленных персональных данных в случае отказа от дальнейшего обслуживания Оператором ПД и посещения его интернет-сайта.

Шины и диски в Курске

Купить шины и диски высокого качества не дорого можно только у нас. Интернет-магазин шин «НВК шина» создан для оперативного обеспечения потребителей качественными автошинами и дисками. Поиск в каталоге очень прост и удобен. Сервис подбора шин по параметрам покажет вам только те шины, которые вы ищите, также можно выполнить подбор по марке автомобиля или осуществить подбор диска для нужной зимней или летней резины.

Ассортимент Интернет-магазина «НВК шина» представлен сотнями известных брендов шинной продукции. Любой автовладелец сможет купить шины в Курске, не только высокого качества, но и низкой ценой. Все модели шин, можно приобрести по выгодной цене, от прямых поставщиков изготовителя. С нашей помощью, вы сможете купить шины не выходя из дома. У нас регулярно проводятся акция «Снизим цену» в городам, где расположенный пункты выдачи заказов, на которых можно приобрести шины по весьма выгодной стоимости. Мы всегда будем рады помочь, сделать ваш автомобиль более надёжным.

Купить шины и диски — быстро, легко и не дорого!

Для покупки шины или диска необходимо пройти регистрацию или использовать покупку в 1 клик, заполнив простую форму заказа. Если возникли вопросы в поиске или вы не можете выбрать шину, правильно подобрать диск к шине, то наши специалисты расскажут о преимуществах любой модели автошины или дисков, в любое время!!! Мы постарались максимально упростить связь с нами — напишите в чат, позвоните или закажите обратный звонок. У нас можно не только купить шины, но и воспользоваться услугой — Шиномонтаж и Развал-схождения 3D

Обращаясь к нам вы экономите свои деньги, и самое главное вы экономите время! Мы постоянно развиваемся, следим за качеством и ассортиментом товара так как очень дорожим нашими клиентами. Купив шины или диски, каждый может оставить отзыв на сайте, тем самым показать всем достоверность наших слов! Для лучшей помощи подбора шины и дисков, персонал постоянно обучается на семинарах направленных на ознакомление с новинками автошин и их техническими характеристиками. Нам важно, чтобы сотрудник компании отлично знал ассортимент товара и мог оказать качественную профессиональную консультацию в покупки шины или диска.

Наша популярность среди автовладельцев обусловлена главными факторами:

  • Низкие цены на шины и диски, чем у других участников рынка
  • Скидки для постоянных клиентов
  • Большой выбор шин и дисков
  • Пункты выдачи заказов по России;
  • ЗАКАЗ без предоплаты
  • Гарантия на весь товар, приобретенный в нашем магазине

ВНИМАНИЕ:После уведомления о поступлении заказа на склад, товар в резерве находится в течении 3-х дней.

Информация на данном интернет-сайте носит исключительно информационный (ознакомительный) характер и ни при каких условиях не является публичной офертой, определяемой положениями Статьи 437 Гражданского кодекса РФ.

Открытие и разработка новых ингибиторов ДНК-PK путем нацеливания на уникальное взаимодействие Ku-ДНК | Исследование нуклеиновых кислот

Аннотация

ДНК-зависимая протеинкиназа (ДНК-PK) играет критическую роль в пути репарации негомологичного соединения концов (NHEJ) и ответе на повреждение ДНК (DDR). Поэтому DNA-PK использовался для разработки противораковых терапевтических средств в сочетании с ионизирующим излучением (IR). Мы сообщаем об открытии нового класса ингибиторов ДНК-PK, которые действуют посредством нового механизма действия — ингибирования взаимодействия Ku-ДНК.Мы разработали серию высокоэффективных и специфических ингибиторов связывания Ku-ДНК (Ku-DBi), которые блокируют взаимодействие Ku-ДНК и ингибируют активность киназы ДНК-PK. Ku-DBi напрямую взаимодействует с Ku и ингибирует in vitro, NHEJ, клеточный NHEJ, и усиливает клеточную активность радиомиметических агентов и IR. Анализ Ku-нулевых клеток показывает, что клеточная активность Ku-DBi является прямым результатом ингибирования Ku, поскольку Ku-нулевые клетки нечувствительны к Ku-DBi. Полезность Ku-DBi также была выявлена ​​в модели редактирования генов CRISPR, где мы продемонстрировали, что эффективность событий вставки генов была увеличена в клетках, предварительно обработанных Ku-DBi, в соответствии с ингибированием NHEJ и активацией гомологичной рекомбинации для облегчения вставка гена.Эти данные демонстрируют открытие и применение новой серии соединений, которые модулируют пути репарации ДНК с помощью уникального механизма действия.

ВВЕДЕНИЕ

DNA-PK, серин / треониновая протеинкиназа, является членом суперсемейства PI-3 kinase-related-kinase (PIKK) (1). Холофермент ДНК-PK состоит из каталитической субъединицы 469 кДа, ДНК-PKcs и ДНК-связывающего комплекса Ku 70/80. DNA-PKcs и Ku 70/80 участвуют во многих путях метаболизма ДНК, которые могут влиять на развитие и лечение опухолей, NHEJ, DDR и стабильность теломер (2).DNA-PK необходим для катализированной NHEJ репарации DSB (3). После индукции DSB белок Ku связывается с концами ДНК; за этим следует связывание ДНК-PKcs. Автофосфорилирование ДНК-PKcs и фосфорилирование других белков-мишеней требует сборки комплекса ДНК-PKcs-Ku на конце ДНК, который способствует процессингу, диссоциации ДНК-PK и возможной ассоциации комплекса ДНК-лигаза IV / XRCC4 / XLF чтобы катализировать окончательную реакцию ремонта соединения концов. DNA-PK также участвует в более крупном ответе на повреждение ДНК (DDR).В этом качестве он может фосфорилировать ATM и другие нижестоящие мишени, а также фосфорилироваться с помощью ATM и ATR. Этот коллективный ответ гарантирует, что клетки могут реагировать на все типы повреждений ДНК, способствуя выживанию. Ингибирование DDR преследуют с помощью низкомолекулярных ингибиторов, разработанных для нацеливания почти на все киназы в этом пути. Кроме того, белок Ku был локализован в теломерах, где он защищает концы хромосом. Хотя точные механизмы защиты все еще выясняются, современные модели включают защиту от деградации концов, катализируемой нуклеазами, и, в последнее время, блокирование вырезания и / или рекомбинации теломер (4).Важно отметить, что воздействие на теломеры является Ku-специфическим и не зависит от ДНК-PKcs (5,6). Следовательно, можно ожидать, что на поддержание теломер будут по-разному влиять Ku-ингибиторы по сравнению с целевыми средствами DNA-PKcs.

DNA-PK не регулируется при многих формах рака, и опухоли становятся зависимыми от повышенной активности ДНК-PK в ответ на нестабильность генома, связанную с нерегулируемым ростом раковых клеток (7–9). Повышенная способность опухолевых клеток восстанавливать DSB также является основным фактором устойчивости к химио- и лучевой терапии.Таким образом, блокирование ДНК-PK-зависимой репарации было продемонстрировано во многих системах для повышения чувствительности к обоим методам лечения рака (10–14). Большинство ингибиторов ДНК-PK нацелены на активный центр каталитической субъединицы ДНК-PKcs, и исходные молекулы не обладают специфичностью, метаболически нестабильны и обладают плохими фармакокинетическими профилями, которые препятствуют начальному развитию этих молекул (15,16). Совсем недавно многие из этих проблем были устранены, и клинические исследования были продвинуты с использованием ингибиторов ДНК-PK компании Merck (M3418 / nedisertib) и Celgene (CC-115), которые исследуются в качестве монотерапии и в сочетании с IR при лечении запущенных солидных опухолей.

Здесь мы описываем открытие высокоэффективных и селективных ингибиторов ДНК-PK, механизм действия которых заключается в блокировании взаимодействия гетеродимера Ku70 / 80 с ДНК. Мы демонстрируем прямое взаимодействие наших соединений с гетеродимером Ku и ингибирование связывания Ku-ДНК и каталитической активности ДНК-PKcs. Мы демонстрируем сильное ингибирование катализированной NHEJ активности лигирования in vitro в экстрактах целых клеток, компетентных в NHEJ, а также снижение клеточного NHEJ. Представлены данные, демонстрирующие, что клеточный ответ является результатом ингибирования Ku и что соединения усиливают клеточную чувствительность к агентам, индуцирующим DSB.Кроме того, химически направленное ингибирование Ku увеличивает частоту гомологически-направленной репарации (HDR) в технологии редактирования генов CRISPR-Cas9, тем самым обеспечивая новое понимание и полезность Ku-DBI.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Химия

Синтетические схемы, процедуры и характеристики соединений приведены в дополнительных данных.

Вычислительные методы

Докинг-исследования были проведены с использованием существующих кристаллических структур гетеродимера Ku70 / 80 (PDB: 1JEQ) и димера Ku70 / 80, связанного с 55-нуклеотидным ДНК-субстратом (PDB: 1JEY), полученных из банка данных по белкам (PDB) и приготовленных с помощью Мастера подготовки протеина (17).Были назначены типы атомов силового поля и порядки связей, добавлены недостающие атомы, назначены состояния таутомера / ионизации, были взяты образцы ориентации воды, остатки Asn, Gln и His были изменены, чтобы оптимизировать сеть водородных связей, и была выполнена ограниченная минимизация энергии. Ku-DBi были нарисованы в ChemDraw как molfiles MDL и подготовлены к стыковке с использованием LigPrep, включая минимизацию с помощью силового поля OPLS3. Все хиральные центры были сохранены, как указано в литературе. Была создана одна низкоэнергетическая кольцевая конформация на соединение.Состояния ионизации и формы таутомеров подсчитывали при pH 7,0 ± 2,0 с помощью Epik.

Ku-DBi были гибко закреплены в щели, определяемой остатками, с использованием протокола Glide Extra-Precision (XP) с настройками по умолчанию (18). Позы стыковки оценивались на основе визуального опроса и подсчета баллов стыковки. Позы были выбраны в соответствии с режимом привязки и XP GScore. Функция оценки Glide Extra-Precision (XP) использовалась для потенциальных аминокислотных взаимодействий, которые определялись на основе близости к каждому соединению, как было выявлено с помощью стыковочного анализа.Взаимодействия Ku 70/80 с Ku-DBi просматривали с помощью Pymol с изображениями взаимодействий с рисунками, поверхностями и соединениями. Все молекулярное моделирование в рамках этого исследования было выполнено с использованием программного обеспечения Maestro версии 11 (Schrödinger), работающего в среде Linux.

Очистка белка

Гетеродимер Ku 70/80 был очищен из инфицированных бакуловирусом клеток SF9, как описано ранее (19). ДНК-PKcs очищали из клеток HeLa или клеток HEK 293, как описано ранее (20).

Анализ биохимической активности

Анализ сдвига электрофоретической подвижности (EMSA) использовали для оценки активности связывания Ku-ДНК и эффекта потенциальных ингибиторов. Реакции проводили с меченным [ 32 P] дуплексом длиной 30 п.н. и очищенным Ku. Субстрат ДНК получали отжигом 5 ‘- [ 32 P] -CCCTATCCTTTCCGCGTCCTTACTTCCCC-3′ с его комплементом. Ku предварительно инкубировали с различными концентрациями соединения перед добавлением к реакционной смеси EMSA, содержащей ДНК.Реакции инкубировали в течение 30 мин при 25 ° C и продукты разделяли электрофорезом в 6% неденатурирующем полиакриламидном геле. Гели были визуализированы с помощью PhosphorImager и количественно определены с помощью ImageQuant (Molecular Dynamics), как мы описали ранее (20,21).

Анализы

киназ для оценки каталитической активности ДНК-ПК проводили для измерения ДНК-зависимого переноса [ 32 P] от АТФ на синтетический пептидный субстрат на основе р53, как описано ранее (20,22). Вкратце, соединения предварительно инкубировали с ДНК-PKcs / Ku в течение 15 мин и реакции инициировали добавлением АТФ, ДНК и пептида.В киназных анализах использовали ту же дуплексную ДНК размером 30 п.н., за исключением метки [ 32 P]. Анализы фосфорилирования ДНК-PK проводили при 37 ° C в течение 15 минут и останавливали 30% уксусной кислотой. Продукты реакции наносили пятнами на фильтровальную бумагу P81, которую затем промывали пять раз по 5 мин в 15% уксусной кислоте, затем один раз в 100% метаноле и давали высохнуть. Фильтры экспонировали на экране PhosphorImager и анализировали с помощью программного обеспечения ImageQuant (Molecular Dynamics). Анализы титрования ингибиторов (как EMSA, так и DNA-PK) проводили в трех экземплярах, и данные соответствовали стандартным кривым связывания с использованием GraphPad Prism для расчета значений IC 50 .

Реакции аутофосфорилирования проводили, как описано нами (23). Вкратце, ДНК-ПК инкубировали, как описано выше, за исключением исключения пептида и радиоактивного индикатора. Реакции останавливали добавлением буфера для образца SDS и нагревали до 70 ° C в течение 5 мин. Образцы разделяли с помощью SDS PAGE на 4–20% денатурирующих гелях акриламида и переносили в PVDF. Блоты блокировали и зондировали с помощью кроличьего моноклонального антитела, специфичного для кластера ДНК-PKcs фосфо-Ser 2056, и вторичного конъюгированного с HRP козьего антитела против кролика.Изображения были получены с использованием хемилюминесцентного детектирования. Блоты удаляли, повторно зондировали на общую ДНК-PKcs с использованием мышиного моноклонального антитела и вторичного козьего антитела против мышиного HRP и визуализировали с помощью хемилюминесценции.

Анализ термического сдвига (TSA)

Чтобы напрямую рассмотреть взаимодействие Ku-DBi с Ku-белком, мы использовали TSA (24). Готовили 220 мкл основной реакционной смеси Ku либо с ДМСО в качестве контроля носителя, либо с указанным Ku-DBi, и 20 мкл распределяли в 10 отдельных пробирок.Пробирки инкубировали при указанных температурах в течение 3 мин в термоциклере, охлаждали до 4 ° C и осаждали при 12000 × г в течение 20 мин. Растворимый белок в супернатанте собирали и разделяли с помощью SDS-PAGE, переносили в PVDF и Ku 70 определяли вестерн-блоттингом с использованием хемилюминесцентного обнаружения. Количественную оценку интенсивности полос выполняли с помощью MultiGage с использованием тепловизора Fuji LAS-3000.

Экран Kinase

Скрининг протеинкиназ проводили с использованием системы анализа ADP-Glow (25).Отобранные для анализа 24-киназы и их субстрат были получены от Promega. Каждую киназу и соответствующий ей субстрат анализировали в трех повторностях с 2,5 мкМ и без них 68 или 245 в формате 96-луночного планшета. Образовавшийся АДФ определяли в анализе сопряженной люциферазы после истощения АТФ и служили показателем фосфорилирования. Степень ингибирования рассчитывали по сравнению с контрольными носителями ДМСО.

In vitro Анализ NHEJ

In vitro NHEJ-анализы выполняли в основном, как описано ранее (19).Вкратце, реакции (10 мкл) проводили в 50 мМ HEPES pH 8,0, 100 мМ KOAc, 0,5 мМ Mg (OAc) 2 , 1 мМ АТФ, 1 мМ DTT и 0,1 мг / мл бычьего сывороточного альбумина (BSA) и указанная концентрация Ku-DBi. ДНК pBluescript линеаризовали с помощью HindIII и метили 5′- 32 P. Реакции содержали 10 нг ДНК и 25 мкг экстракта цельных клеток. Реакции инкубировали при 37 ° C в течение 2 часов, останавливали добавлением протеиназы K / SDS / EDTA и инкубировали еще 30 минут при 37 ° C. Продукты разделяли электрофорезом на 0.6% агарозные гели. Продукты обнаруживали в высушенных гелях с помощью анализа PhosphorImager (BioRad PMI).

Культура клеток

Ku80-wt и нулевые фибробласты мышиных эмбрионов (MEF) были первоначально получены от Dr Gloria Li (26), а клетки NCI-h560 (ATCC® HTB177 ™) (h560) культивировали в среде RPMI с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки. Клетки (5 × 10 3 ) высевали в лунки 96-луночного планшета и инкубировали в течение 24 ч перед любыми обработками. Затем клетки обрабатывали Ku-DBi, блеомицином или этопозидом, как указано, в течение 48 часов в Opti-MEM.Концентрация носителя (ДМСО) поддерживалась постоянной на уровне 1%. Метаболизм / жизнеспособность клеток оценивали с помощью анализа митохондриального метаболизма (CCK-8), как мы описали ранее (27). Этот анализ основан на образовании водорастворимого продукта формазана клеточными дегидрогеназами и пропорционален количеству живых клеток. После ~ 2-часовой инкубации с реагентом CCK-8 оптическую плотность измеряли при 450 нм и сравнивали с контролями, обработанными носителем, для определения процента жизнеспособности. Представленные результаты представляют собой среднее значение и SEM трех определений.

Анализ реактивации клеток-хозяев NHEJ

Анализ клеточной NHEJ-зависимой репарации повреждений DSB выполняли с использованием анализа реактивации клетки-хозяина, как мы ранее описывали (28). Вкратце, клетки h560 высевали в 6-луночные планшеты и инкубировали за 24–48 ч до анализа. Клетки предварительно обрабатывали в течение 2 ч носителем или указанным Ku-DBi в Opti-MEM (Gibco) с постоянной концентрацией ДМСО (1%). Затем клетки трансфицировали электропорацией с использованием устройства Amaxa nucleofector (Lonza) с помощью AfeI-линеаризованного pMax-GFP или непереваренного (кольцевого) pMax-GFP (0.2 мкг, Lonza). Полное переваривание плазмиды pMax-GFP подтверждали электрофорезом в агарозном геле перед трансфекцией; сайт тупого разреза расположен между промотором pMax и сайтами экспрессии GFP, что требует репарации NHEJ для экспрессии GFP. Котрансфекцию с ковалентно замкнутой кольцевой pCMV-E2-Crimson (0,2 мкг, Takara Bio USA) использовали в качестве контроля трансфекции во всех экспериментах. Клетки инкубировали в течение 24–48 ч, как указано, чтобы обеспечить возможность повторного присоединения pMax-GFP. Экспрессию репортеров флуоресценции идентифицировали с помощью проточной цитометрии (BD FACSCaliber).Эффективность NHEJ представлена ​​как отношение GFP / E2-Crimson по сравнению с контрольными клетками, трансфицированными обоими репортерами на ковалентно замкнутых кольцевых плазмидах.

Иммунофлуоресцентная микроскопия

Клетки

h560 культивировали в 24-луночных планшетах на покровных стеклах в течение ночи перед обработкой. Клетки обрабатывали 10 мкМ блеомицина в течение 1 ч при 37 ° C и 20 мкМ ингибитора 245 , одновременно или с 1 или 2 ч предварительно инкубированным ингибитором Ku. После 1-часовой обработки блеомицином клетки промывали PBS, фиксировали 4% холодным параформальдегидом в течение 20 минут, повышали проницаемость в 0.1% Triton X-100 в течение 10 минут, промытый и заблокированный в блокирующем растворе (3% BSA, 5% козья сыворотка в PBS) в течение 30 минут при комнатной температуре. Первичные антитела, кроличьи антифосфо-ДНК-PKcs S2056 (Abcam, ab124918) и мышиные антифосфо-γh3A.X S139 (BioLegend, 613401) получали при разведении 1: 200 в блокирующем растворе и инкубировали в течение ночи при 4 ° C. Затем соответствующее вторичное антитело, конъюгированное с Alexa Fluor 488 или 594, инкубировали в блокирующем растворе в течение 2 часов при комнатной температуре. Клетки на покровных стеклах помещали на предметные стекла в антифатинговой среде с DAPI (H-1500, VectaShield HardSet, Vector Laboratories).Изображения получали в цифровом виде с использованием инвертированной многоканальной флуоресцентной системы визуализации EVOS FL Auto 2 (Invitrogen) с 10-кратным или 60-кратным иммерсионным увеличением. Изображения были подвергнуты количественному анализу интенсивности флуоресценции с использованием расширенной версии ImageJ FIJI. Положительные области DAPI в 200 ядрах были определены как области интереса (ROI) на поле, и три поля были оценены для каждого условия. Сигналы DAPI, DNA-PKcs p-S2056 и phospho-γh3A.X S139 определяли в синем, зеленом или красном каналах соответственно.

Облучение клеток

клеток h560 высевали в 24-луночные планшеты за 18–24 ч до экспериментов. За два часа до облучения среду заменяли и к клеткам добавляли свежую среду Opti-MEM, содержащую либо Ku-DBi, либо DMSO носитель. Перед облучением планшеты помещали на лед на 15 мин. Затем экспоненциально растущие клетки облучали на льду 2 или 5 Гр рентгеновскими лучами 160 кВп с использованием прецизионного рентгеновского аппарата (North Branford, CT) при мощности дозы 67,6 сГр / мин.Дозиметрические измерения излучения проводили с использованием ионизационной камеры типа Фармер (PTW Model N30013, Фрайбург, Германия) в сочетании с электрометром Keithley (Модель K602, Кливленд, Огайо). После облучения клетки инкубировали на льду 10 минут перед тем, как дать им возможность восстановиться при 37 ° C, 5% CO 2 в течение 24 часов. Жизнеспособность оценивали с помощью тестов на клоногенную выживаемость. Клетки отделяли трипсином, высевали и инкубировали в течение 10–14 дней. Затем планшеты фиксировали, окрашивали и подсчитывали колонии.Выжившие фракции определяли и нормализовали по эффективности посева клеток, обработанных только носителем.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Оптимизация низкомолекулярных химических ингибиторов Ku

В ходе наших усилий по расширению таргетной терапии репарации ДНК мы обнаружили, что соединение X80 (рис. 1A) проявляет скромную ингибирующую активность in vitro при оценке активности связывания двухцепочечной ДНК Ku in vitro .Мы проверили серию производных сложного эфира и карбоновой кислоты арилпиразолонового фрагмента (кольцо B), а также арил / алкилового эфира и производного амида кольца A, чтобы идентифицировать соединения 5102 и 5135 , которые продемонстрировали резко повышенную эффективность, но оба соединения были очень нерастворимы и нестабильны, что делает их ограниченно полезными для in vitro или клеточного анализа (29). Определив, что модификации X80 могут давать более активные соединения, мы приступили к междисциплинарным усилиям в области синтетической химии, основанной на структуре, для создания высокоаффинных соединений с благоприятными химическими свойствами.Используя существующие кристаллические структуры гетеродимера Ku70 / 80 (PDB: 1JEQ) и димера Ku70 / 80, связанного с 55-нуклеотидным субстратом ДНК (PDB: 1JEY), мы идентифицировали карман связывания лиганда для ядерной структуры X80 , расположенной в непосредственная близость к центральной области взаимодействия ДНК, которая окружает спираль ДНК (рис. 1B). Предполагаемый карман для связывания охватывает поверхность раздела между субъединицами Ku70 (голубой) и Ku80 (пурпурный). При более внимательном рассмотрении был обнаружен карман, заполняющий пространство, расположенный рядом с кольцом A X80 , который охватывает поверхность раздела между двумя субъединицами Ku (рис. 1C).Этот интерфейс может вмещать дополнительные фенильные кольца, присутствующие в мощных молекулах 5102 и 5135 (29). Поэтому мы изменили связь со сложного эфира на амид, чтобы исследовать этот карман с помощью различных производных X80 . Наиболее эффективной модификацией, которую мы идентифицировали, было включение 3-метоксифенильного фрагмента с образованием соединения 68 . Эта модификация привела к 4-кратному увеличению ингибирующей активности связывания Ku-ДНК (рис. 2) и значительному увеличению растворимости по сравнению с производными 5102 и 5135 .

Рисунок 1.

( A ) Структура X80 со значениями Ku EMSA и DNA-PK IC 50 . ( B ) Карман для привязки X80 в ядре Ku70 / 80. Ku70 отображается голубым, а Ku80 — пурпурным. Кольцевая структура ДНК изображена оранжевым цветом (модель круглой палочки), а соединение X80 — красным (сферы). ( C ) Схематическое изображение обоснования исследования SAR: карман, окружающий кольцо A соединения X80 для дальнейшей оптимизации (Ku70 показан желтым цветом, а Ku80 серой поверхностью).

Рисунок 1.

( A ) Структура X80 со значениями Ku EMSA и DNA-PK 50 . ( B ) Карман для привязки X80 в ядре Ku70 / 80. Ku70 отображается голубым, а Ku80 — пурпурным. Кольцевая структура ДНК изображена оранжевым цветом (модель круглой палочки), а соединение X80 — красным (сферы). ( C ) Схематическое изображение обоснования исследования SAR: карман, окружающий кольцо A соединения X80 для дальнейшей оптимизации (Ku70 показан желтым цветом, а Ku80 серой поверхностью).

Рисунок 2.

EMSA-анализ ингибиторов Ku. ( A ) Ингибирование связывания Ku-ДНК по оценке EMSA. Анализы связывания выполняли, как описано в разделе «Материалы и методы». Указанные соединения инкубировали в реакции с ДНК и очищенным Ku, продукты реакции разделяли с помощью нативного гель-электрофореза. Гели визуализировали и количественно оценивали с помощью анализа PhosphorImager. ( B ) Количественная оценка данных EMSA. Значения IC 50 были рассчитаны как минимум из трех независимых экспериментов с использованием GraphPad Prism, и данные представлены в таблице 1.

Рисунок 2.

EMSA-анализ ингибиторов Ku. ( A ) Ингибирование связывания Ku-ДНК по оценке EMSA. Анализы связывания выполняли, как описано в разделе «Материалы и методы». Указанные соединения инкубировали в реакции с ДНК и очищенным Ku, продукты реакции разделяли с помощью нативного гель-электрофореза. Гели визуализировали и количественно оценивали с помощью анализа PhosphorImager. ( B ) Количественная оценка данных EMSA. Значения IC 50 были рассчитаны как минимум из трех независимых экспериментов с использованием GraphPad Prism, и данные представлены в таблице 1.

Ядро соединения X80 содержит углерод-углеродную двойную связь (алкен) между фурановым и пиразолоновым кольцами, и поэтому производные X80 существуют в виде рацемической смеси изомеров Z и E с Z изомер — основной продукт (~ 73–80%), как определено анализом NOESY ЯМР (данные не показаны). Чтобы исследовать важность двойной связи, мы уменьшили двойную связь до одинарной, получив соединение 149 , которое привело к дальнейшему увеличению ингибирующей активности Ku (Рисунок 2) по сравнению с 68 .Замена метильной группы пиразолонового кольца в соединении 149 на биоизостерическую трифторметильную группу приводила к соединению 322 , и снова наблюдали дальнейшее повышение активности в отношении Ku в анализе связывания ДНК. Эти данные демонстрируют, что двойная связь на самом деле не критична для ингибирующей активности Ku, а вместо этого несколько вредна для взаимодействия Ku-ингибитор.

На заключительном этапе оптимизации мы оценили, как биоизостерическая модификация карбоновой кислоты фенильного кольца B соединения 149 влияет на ингибирующую активность. In silico исследования стыковки показали, что фрагмент карбоновой кислоты (кольцо B) образует водородную связь с Arg368 (рис. 3A), которая, как мы утверждали, важна для ингибирования Ku. Интересно, что замена тетразола на биоизостер карбоновой кислоты (соединение 245 ) продемонстрировала мощную ингибирующую активность Ku, а молекулярный стыковочный механизм показал более тесное связывание, чем фрагмент карбоновой кислоты, для фрагмента тетразола с белком Ku (рис. 3B). Тетразольный фрагмент и 3-метоксифенильная группа соединения 245 образуют сеть водородных связей с ключевым остатком Arg368.Кроме того, фенил-тетразольный фрагмент имеет хорошие возможности для осуществления π-π-стэкинг-взаимодействий с Phe365. Основная структура соединения 149 и 245 в основном стабилизировалась в большой гидрофобной полости, сетке водородных связей, взаимодействиях катион-π и π-π с промежутками аминокислотных остатков на границе раздела между субъединицами Ku70 и Ku80. Аминокислотные остатки, участвующие в связывающем кармане, представляют собой Tyr264, Phe365, Ala366, Ala367, Arg368, Asp369, Asp370, Glu371, Ala374, Leu377, Ser 378 в Ku80 и Tyr416, Glu417, Met446, Pro447, Phe448, Thr50ys45, Glu448. и Ile452 в Ku70.Молекулярный докинг (GLIDE) определил аналогичные положения связывания для обоих соединений с самыми низкими предсказанными оценками GLIDE XP -7,06 и -7,51 ккал / моль для 149 и 245 соответственно. Оба соединения показали хорошую корреляцию между оценкой стыковки и биологической активностью (таблица 1) (18). Двумерные взаимодействия соединения 149 и 245 представлены в дополнительных данных (дополнительный рисунок S1). Эти данные подтверждают важность гидрофобной полости и сети водородных связей карбоновой кислоты (соединение 149 ) и биоизостера тетразола (соединение 245 ), продемонстрировали мощную ингибирующую активность Ku, а молекулярный докинг показал аналогичные тесные взаимодействия с белком Ku. (Рисунок 3A и B).Эти данные подтверждают важность сети водородных связей в облегчении и / или стабилизации взаимодействия соединение-Ku.

Рис. 3.

Исследования молекулярного докинга (PDB: 1JEQ и 1JEY). ( A и B ) Молекулярные взаимодействия соединения 149 (A) и 245 (B) (все в желтом углероде) с гетеродимером Ku70 / 80 (ключевые аминокислоты показаны голубым углеродом (Ku70), зеленый углерод (Ku80) и карикатура показаны голубым цветом).Кольцевая структура ДНК изображена светло-оранжевыми точками. Взаимодействие с боковыми цепями аминокислот показано пунктирными пурпурными линиями, а взаимодействия π – π-стэкинга показаны сплошной пурпурной гантелью. Расстояния взаимодействия указаны в Å.

Рис. 3.

Исследования молекулярного докинга (PDB: 1JEQ и 1JEY). ( A и B ) Молекулярные взаимодействия соединения 149 (A) и 245 (B) (все в желтом углероде) с гетеродимером Ku70 / 80 (ключевые аминокислоты показаны голубым углеродом (Ku70), зеленый углерод (Ku80) и карикатура показаны голубым цветом).Кольцевая структура ДНК изображена светло-оранжевыми точками. Взаимодействие с боковыми цепями аминокислот показано пунктирными пурпурными линиями, а взаимодействия π – π-стэкинга показаны сплошной пурпурной гантелью. Расстояния взаимодействия указаны в Å.

Таблица 1. Химическая структура

и профиль активности Ku-DBi

Таблица 1.

Химическая структура и профиль активности Ku-DBi

Механизм ингибирования ДНК-PK

Создав библиотеку соединений с хорошей стабильностью, растворимостью и сильным ингибированием Ku, мы оценили их влияние на активность киназы ДНК-PK. In vitro были проведены анализы киназы , и результаты показали, что производные X80 были мощными ингибиторами активности киназы ДНК-PK (фиг. 4). Интересно, что значения IC 50 , рассчитанные в экспериментах по титрованию, показали более низкие значения по сравнению с теми, которые получены в экспериментах по ингибированию Ku (Таблица 1). Эти результаты, вероятно, являются функцией различных анализов, при этом связывание Ku представляет собой остановленный стехиометрический анализ, а анализ киназы — это стационарный кинетический анализ.Данные по киназной активности выгодно сравнивались с данными, полученными с коммерчески доступным агентом, нацеленным на каталитические сайты, Nu7441 , который показал наномолярные значения IC 50 в анализе киназы in vitro , не оказывая влияния на активность связывания Ku-ДНК ( Рисунки 2B и 4B). Эти результаты подтверждают новый механизм действия ингибиторов Ku по ингибированию ДНК-PK путем блокирования взаимодействия Ku-ДНК.

Рисунок 4.

Активность ДНК-ПК ингибируется Ku-направленными агентами.( A и B ). Анализы киназ выполняли, как описано в разделе «Материалы и методы», с указанными соединениями. Данные представляют собой среднюю и стандартную ошибку для 2–3 повторов, а значения IC 50 были рассчитаны с использованием GraphPad Prism и данных, представленных в таблице 1. ( C ). Аутофосфорилирование ДНК-PKcs в кластере Ser 2056 было оценено in vitro. и обнаруживается с помощью вестерн-блоттинга, как описано в разделе «Материалы и методы». Отрицательный контроль не содержал ДНК и АТФ, а положительный контроль был с ДМСО (носитель).Индивидуальные Ku-DBi (20 мкМ), положительный ингибирующий контроль (Nu7441, 5 нМ) и отрицательный контроль ( 329 , 10 мкМ) были включены, как указано. Продукты реакции разделяли с помощью SDS-PAGE, переносили в PVDF и зондировали последовательно для обнаружения фосфо-ДНК-PKcs (верхняя панель) и общей ДНК-PKcs (нижняя панель), как указано.

Рисунок 4.

Активность ДНК-PK ингибируется агентами, нацеленными на Ku. ( A и B ). Анализы киназ выполняли, как описано в разделе «Материалы и методы», с указанными соединениями.Данные представляют собой среднюю и стандартную ошибку для 2–3 повторов, а значения IC 50 были рассчитаны с использованием GraphPad Prism и данных, представленных в таблице 1. ( C ). Аутофосфорилирование ДНК-PKcs в кластере Ser 2056 было оценено in vitro. и обнаруживается с помощью вестерн-блоттинга, как описано в разделе «Материалы и методы». Отрицательный контроль не содержал ДНК и АТФ, а положительный контроль был с ДМСО (носитель). Индивидуальные Ku-DBi (20 мкМ), положительный ингибирующий контроль (Nu7441, 5 нМ) и отрицательный контроль ( 329 , 10 мкМ) были включены, как указано.Продукты реакции разделяли с помощью SDS-PAGE, переносили в PVDF и зондировали последовательно для обнаружения фосфо-ДНК-PKcs (верхняя панель) и общей ДНК-PKcs (нижняя панель), как указано.

in vivo , релевантное фосфорилирование ДНК-ПК — это аутофосфорилирование кластера Ser 2056 (30). Поэтому мы определили влияние наших Ku-DBi на in vitro, аутофосфорилирование ДНК-PKcs с помощью вестерн-блоттинга. Данные, представленные на рисунке 4C, демонстрируют, что на самом деле аутофосфорилирование кластера Ser 2056 ингибируется отдельными Ku-DBi.Ингибирование специфично, поскольку контрольный ингибитор взаимодействия ДНК-белок 329 , который нацелен на репликационный белок A (31), не влияет на аутофосфорилирование Ser 2056.

В то время как разработка производных X80 была сосредоточена на оптимизации прямых взаимодействий с белками Ku, механизм мог быть функцией связывания соединений с ДНК и ингибирования связывания Ku. Сначала мы оценили связывание с ДНК с помощью анализа смещения флуоресценции (FDA), как мы описали для предыдущих производных X80 (21).Подобно предыдущим результатам, данные, полученные с более новыми производными, показывают минимальное прямое взаимодействие ДНК до концентраций, 10 × рассчитанных IC 50 для активности киназы ДНК-PK (дополнительный рисунок S2). Следовательно, прямое связывание ДНК или интеркаляция Ku-DBi не может объяснить наблюдаемое ингибирование активности связывания Ku-ДНК и активности киназы ДНК-PK. Чтобы определить, действительно ли производные X80 связываются непосредственно с Ku для придания ингибирующей активности, мы использовали анализ сдвига термостабильности (TSA).В этом анализе оценивается термостабильность белка Ku и определяется влияние связывания производного X80 на профиль денатурации. Вкратце, белок инкубируют с носителем или фиксированной концентрацией ингибитора, а затем нагревают до различных температур. После нагревания раствор осаждают, чтобы осадить денатурированный белок. Затем растворимый белок отделяют с помощью SDS-PAGE и обнаруживают вестерн-блоттингом. Данные показывают, что Ku денатурирует при температуре 50 ° C T m .Добавление соединения 245 привело к сдвигу на 6 ° C T m до 56 ° C (Фигуры 5A и B). В целом, FDA и TSA поддерживают вывод, что производные X80 ингибируют взаимодействие Ku-ДНК путем прямого связывания с белком Ku и конкурентного блокирования его ассоциации с ДНК. Неспособность образовывать функциональный комплекс Ku-ДНК на концах ДНК приводит к снижению каталитической активности ДНК-PK за счет ингибирования комплекса ДНК-PKcs-Ku-ДНК, необходимого для киназной активности.Это представляет собой новый механизм ингибирования ДНК-PK, при котором активность киназы отменяется путем блокирования взаимодействия Ku-ДНК.

Рисунок 5.

Анализ теплового сдвига (TSA) белка Ku. ( A ) Очищенный Ku обрабатывали носителем или 245 и измеряли термостабильность с помощью вестерн-блоттинга Ku70. ( B ) Интенсивность полосы нормализовали к точке 40 ° C и наносили на график в зависимости от температуры. Данные были подогнаны к 4-параметрической сигмоидальной кривой и определено T 1/2 .Ошибка, связанная с подгонкой, составляла <0,5 ° C. ( C ) Специфичность киназы. Указанные соединения оценивали с помощью киназного скрининга с использованием ADP-Glo, как описано в разделе «Материалы и методы». Процент оставшейся активности для каждой киназы был рассчитан и представлен в виде тепловой карты.

Рис. 5.

Анализ теплового сдвига (TSA) белка Ku. ( A ) Очищенный Ku обрабатывали носителем или 245 и измеряли термостабильность с помощью вестерн-блоттинга Ku70.( B ) Интенсивность полосы нормализовали к точке 40 ° C и наносили на график в зависимости от температуры. Данные были подогнаны к 4-параметрической сигмоидальной кривой и определено T 1/2 . Ошибка, связанная с подгонкой, составляла <0,5 ° C. ( C ) Специфичность киназы. Указанные соединения оценивали с помощью киназного скрининга с использованием ADP-Glo, как описано в разделе «Материалы и методы». Процент оставшейся активности для каждой киназы был рассчитан и представлен в виде тепловой карты.

Специфика Ku-DBi

Установив активность этих соединений in vitro , мы попытались оценить их специфичность.Поскольку мы первоначально обнаружили класс соединений X80 на виртуальном экране на основе XPA (Xeroderma Pigmentosum Group A), мы определили перекрестную реактивность производных X80, нацеленных на Ku, с XPA. Никакого ингибирования активности связывания XPA-ДНК не наблюдалось при концентрациях ниже 20 мкМ (данные не показаны). Эти данные также подтверждают новый механизм действия Ku-DBi, поскольку можно ожидать, что прямая ДНК-связывающая молекула блокирует другие ДНК-связывающие белки. В связи с бурным развитием ингибиторов киназ и анализами для определения специфичности киназ мы оценили ряд киназ на предмет ингибирования Ku-DBi.Поскольку DNA-PK является единственной киназой, которая требует связывания Ku-ДНК для активности, мы ожидаем минимальной ингибирующей активности против других киназ. Результаты демонстрируют, что большинство из 24 протестированных киназ не ингибируются в значительной степени производными X80 (рис. 5C) при концентрации 2,5 мкМ, что близко к IC 50 соединения 68 и в 10 раз к IC 50 . соединения 245 в анализе киназы ДНК-ПК. Интересно, что киназа MELK действительно демонстрирует умеренное ингибирование с помощью 245 , что согласуется с предыдущими данными, демонстрирующими, что арилпиразолоновый фрагмент обладает значительным сродством к активному сайту киназы и блокирует активность киназы (32).Точно так же киназа PIM1 обладает сродством к 3,5-дифенилзамещенным индол / оксоиндолинам, которые принимают конформацию, аналогичную производным X80 , и амидная модификация увеличивает сродство, что согласуется с активностью ингибиторов 68 и 245 (33 , 34). В целом эти данные демонстрируют возможность создания мощных и специфических ингибиторов взаимодействия Ku-ДНК.

Химическое ингибирование Ku блокирует катализируемый NHEJ ремонт DSB

Чтобы определить, как химическое ингибирование Ku влияет на NHEJ, мы провели анализ in vitro , чтобы оценить соединение концов ДНК, катализируемое в бесклеточных экстрактах (28).Вкратце, линеаризованную плазмидную ДНК (3 т.п.н.) инкубируют с внеклеточным экстрактом, полученным из NHEJ-компетентных клеток (HEK 293) и АТФ. Данные показывают, что все протестированные ингибиторы Ku (6 из 6) ингибировали in vitro NHEJ. Репрезентативный эксперимент показывает ингибирование присоединения концов в зависимости от концентрации для соединения 149 (фиг. 6A). Эти данные демонстрируют вовлечение мишени в сложную смесь белков и ингибирование ДНК-PK-зависимого NHEJ. Относительная эффективность по сравнению с нашим анализом EMSA и киназы несколько снижена, что предполагает, что в сложном бесклеточном экстракте эффективная концентрация Ku-DBi снижена, возможно, из-за низкоаффинных взаимодействий с другими белками или деградирует.Данные, подтверждающие снижение эффективной концентрации в экстрактах, были получены при анализе аутофосфорилирования ДНК-PKcs, где эффективность Ku-DBi была снижена по сравнению с высокоочищенными препаратами ДНК-PK (данные не показаны).

Рисунок 6.

Анализ Ku-направленных ингибиторов ДНК-PK на in vitro и клеточном NHEJ. ( A ) Субстрат линеаризованной плазмидной ДНК (3 т.п.н.) с радиоактивной меткой (дорожка 1) и образование плазмидных мультимеров при увеличении концентрации соединения 149 инкубировали с экстрактом (дорожки 2-11).Количественная оценка данных выявила IC 50 ∼15 мкМ для соединения 149 . ( B ) Клеточный NHEJ оценивали по реактивации клетки-хозяина, как описано в разделе «Материалы и методы». Отдельные точки данных представлены вместе со средней и стандартной ошибкой (**** p <-0,0001, *** p <0,001+.

Рисунок 6.

Анализ Ku-направленных ингибиторов ДНК-PK на in vitro и клеточный NHEJ. ( A ). Радиоактивно меченный субстрат линеаризованной плазмидной ДНК (3 т.п.н.) (дорожка 1) и образование плазмидных мультимеров при увеличении концентрации соединения 149 инкубировали с экстрактом (дорожки 2-11).Количественная оценка данных выявила IC 50 ∼15 мкМ для соединения 149 . ( B ) Клеточный NHEJ оценивали по реактивации клетки-хозяина, как описано в разделе «Материалы и методы». Отдельные точки данных представлены вместе со средней и стандартной ошибкой (**** p <-0,0001, *** p <0,001+.

Продемонстрировав ингибирование NHEJ in vitro , мы попытались определить, является ли химическое вещество Ku ингибиторы могут аннулировать клеточный NHEJ.Мы использовали анализ реактивации клетки-хозяина в клетках h560, как мы ранее описывали, для измерения клеточной активности NHEJ (28,35).Вкратце, линеаризованная плазмида, кодирующая ген GFP, трансфицировалась в клетки вместе с плазмидой кольцевой экспрессии RFP в качестве контроля трансфекции. Экспрессия GFP достигается только при повторной циркуляризации плазмиды, опосредованной NHEJ. Отношение зеленых и дальних красных клеток используется для количественной оценки, измеренной с помощью проточной цитометрии. Данные, представленные на Фигуре 6B, демонстрируют, что все Ku-DBi способны значительно уменьшать события репарации, катализируемые NHEJ. Данные показывают примерно 50% -ное сокращение случаев ремонта, катализируемого NHEJ.Интересно, что относительная разница между отдельными Ku-DBi не была очевидна в этом анализе, что позволяет предположить, что другие факторы, помимо активности против Ku, влияют на клеточную активность и могут включать неспецифическое связывание с белками, клеточное поглощение или метаболизм.

Сенсибилизация клеток к DSB и оценка целевой активности

Определив, что наши ингибиторы Ku блокируют клеточный NHEJ, мы провели решающий эксперимент, чтобы определить, действуют ли Ku-DBi через активность ДНК-PKcs.Поэтому мы определили влияние обработки 245 на фосфорилирование кластера ДНК-PKcs Ser 2056. Схема эксперимента изображена на рисунке 7A. Мы оценили предварительную инкубацию 245 за 1 и 2 часа перед 1-часовой экспозицией блеомицина и одновременной 1-часовой комбинированной обработкой 245 и блеомицином. После обработки клетки обрабатывали для иммунофлуоресцентного обнаружения ДНК-PKcs p-S2056 и γ-h3AX. Репрезентативные изображения (фигура 7B) и количественная оценка данных (фигура 7C) демонстрируют снижение фосфорилирования Ser 2056 как функцию обработки 245 .Данные также демонстрируют, что предварительная инкубация приводит к большему снижению аутофосфорилирования. Анализ γ-h3AX также демонстрирует ингибирование DDR как функцию 245 , хотя влияние предварительной инкубации было менее очевидным (рис. 7B и D). Анализ аутофосфорилирования был подтвержден вестерн-блоттингом с серией Ku-DBi (дополнительный рисунок S3).

Рисунок 7.

Сенсибилизация к агентам, индуцирующим DSB, с помощью Ku-нацеленных ингибиторов ДНК-PK.( A ) Схематическое изображение обработки блеомицином и время предварительной инкубации 245 , использованное в этом анализе. Клетки h560 инкубировали в течение 3, 2 или 1 ч с ингибитором 245 (указано черными стрелками) и 1-часовую обработку блеомицином применяли к каждому состоянию (синяя линия) перед фиксацией клеток. ( B ) Иммунофлуоресцентное окрашивание ДНК-PKcs p (S2056) (зеленый) и γh3A.X (pS139) (красный) в клетках h560 после обработки. Необработанные контрольные клетки инкубировали с 1% ДМСО.Клетки фиксировали, иммуноокрашивали и изображения флуоресцентной микроскопии получали цифровым способом с использованием 60-кратного увеличения иммерсионного масла и окрашивали; масштабная линейка: 10 мкм. ( C ) Количественная оценка интегральной интенсивности флуоресценции ДНК-PKcs p (S2056). ( D ) Количественная оценка фокусов γh3AX. Для (C) и (D) флуоресцентной микроскопии изображения клеток h560, подвергнутых обработкам, описанным в (A), были получены в цифровом виде с использованием 10-кратного увеличения и проанализированы с помощью расширенной версии Fiji от ImageJ.Данные, полученные из 200 ячеек (черные кружки), показаны как медиана (красная полоса). Статистический анализ проводился с использованием непарного t -теста; **** P <0,0001; *** P <0,001. ( E ) Клеточное ингибирование взаимодействия Ku-ДНК соединением 68 . Клетки MEF высевали и обрабатывали носителем или 20 мкМ 68 и указанной концентрацией блеомицина. Жизнеспособность клеток оценивали с помощью метаболического анализа CCK-8, и данные представлены в виде среднего значения и SEM трех определений.( F ) Усиление гибели клеток после облучения. После облучения клетки высевали для оценки клоногенной выживаемости, как описано, и данные представляют собой среднее значение и SEM трех определений. * Обозначает точки, которые значительно отличаются от контроля ДМСО с P <0,05. ( G ) Сенсибилизация к этопозиду соединением 322 . Клетки h560 высевали и обрабатывали носителем или 20 мкМ 322 и указанной концентрацией этопозида в течение 48 ч, после чего жизнеспособность клеток определяли с помощью CCK-8.Данные представлены в виде среднего значения и SEM трех определений.

Рисунок 7.

Сенсибилизация к агентам, индуцирующим DSB, с помощью Ku-направленных ингибиторов ДНК-PK. ( A ) Схематическое изображение обработки блеомицином и время предварительной инкубации 245 , использованное в этом анализе. Клетки h560 инкубировали в течение 3, 2 или 1 ч с ингибитором 245 (указано черными стрелками) и 1-часовую обработку блеомицином применяли к каждому состоянию (синяя линия) перед фиксацией клеток.( B ) Иммунофлуоресцентное окрашивание ДНК-PKcs p (S2056) (зеленый) и γh3A.X (pS139) (красный) в клетках h560 после обработки. Необработанные контрольные клетки инкубировали с 1% ДМСО. Клетки фиксировали, иммуноокрашивали и изображения флуоресцентной микроскопии получали цифровым способом с использованием 60-кратного увеличения иммерсионного масла и окрашивали; масштабная линейка: 10 мкм. ( C ) Количественная оценка интегральной интенсивности флуоресценции ДНК-PKcs p (S2056). ( D ) Количественная оценка фокусов γh3AX. Для (C) и (D) флуоресцентной микроскопии изображения клеток h560, подвергнутых обработкам, описанным в (A), были получены в цифровом виде с использованием 10-кратного увеличения и проанализированы с помощью расширенной версии Fiji от ImageJ.Данные, полученные из 200 ячеек (черные кружки), показаны как медиана (красная полоса). Статистический анализ проводился с использованием непарного t -теста; **** P <0,0001; *** P <0,001. ( E ) Клеточное ингибирование взаимодействия Ku-ДНК соединением 68 . Клетки MEF высевали и обрабатывали носителем или 20 мкМ 68 и указанной концентрацией блеомицина. Жизнеспособность клеток оценивали с помощью метаболического анализа CCK-8, и данные представлены в виде среднего значения и SEM трех определений.( F ) Усиление гибели клеток после облучения. После облучения клетки высевали для оценки клоногенной выживаемости, как описано, и данные представляют собой среднее значение и SEM трех определений. * Обозначает точки, которые значительно отличаются от контроля ДМСО с P <0,05. ( G ) Сенсибилизация к этопозиду соединением 322 . Клетки h560 высевали и обрабатывали носителем или 20 мкМ 322 и указанной концентрацией этопозида в течение 48 ч, после чего жизнеспособность клеток определяли с помощью CCK-8.Данные представлены в виде среднего значения и SEM трех определений.

Определив способность ингибировать NHEJ в клетках посредством отмены активности ДНК-PKcs, мы попытались определить, могут ли Ku-DBi сенсибилизировать клетки к агентам, индуцирующим ДНК DSB, и определить, является ли этот эффект результатом прямого взаимодействия с мишенью. между гетеродимером Ku 70/80 и Ku-DBi. Чтобы определить, влияет ли химическое ингибирование Ku на чувствительность к агентам, индуцирующим DSB ДНК, мы оценили жизнеспособность клеток MEF дикого типа (wt) и Ku 80-нулевых MEF по отношению к агенту, индуцирующему DSB, с Ku-DBi и без них.Данные, представленные на фиг. 7E, показывают жизнеспособность клеток, обработанных увеличивающимися концентрациями радиомиметического лекарственного средства блеомицина с Ku-DBi и без них. Клетки одновременно обрабатывали в течение 48 ч 20 мкМ 68 и указанными концентрациями блеомицина. Мы выбрали 20 мкМ 68 на основе предварительных экспериментов с одним агентом, демонстрирующих снижение выживаемости менее чем на 10%, что согласуется с ограниченной токсичностью для нормальных клеток. Как и ожидалось, Ku80-нулевые клетки проявляли повышенную чувствительность к блеомицину (примерно в 6 раз) по сравнению с MEF дикого типа.Повышенная чувствительность к блеомицину, индуцированная 68 , также легко проявляется в клетках дикого типа (сравните черные кружки с синими кружками). Важно отметить, что не наблюдается значительного увеличения чувствительности, индуцированного 68 в Ku80-нулевых клетках (сравните черные треугольники с синими треугольниками). Эти данные убедительно демонстрируют, что наблюдаемый эффект сенсибилизации 68 к блеомицину опосредуется посредством ингибирования на мишени связывания Ku-ДНК с помощью Ku-DBi. Данные также демонстрируют, что химическое ингибирование с помощью Ku-DBi 68 не достигает чувствительности Ku-нулевых клеток.Это указывает на то, что остается возможность увеличить клеточную активность этих ингибиторов либо за счет увеличения активности, либо за счет клеточного поглощения и стабильности.

Аналогичная серия экспериментов была проведена для оценки влияния Ku-DBi на радиочувствительность. Клетки h560 обрабатывали в 24-луночных планшетах либо носителем, либо указанным Ku-DBi в течение 2 часов перед облучением либо 2, либо 5 Гр рентгеновскими лучами. Клеткам давали возможность восстановиться в течение 24 часов, затем высевали для образования колоний и определения клоногенной выживаемости.Повышение радиочувствительности наблюдалось в клетках, обработанных Ku-DBi, и относительная сенсибилизация соответствует эффективности in vitro для Ku-DBi (фигура 7F). Аналогичные результаты наблюдались при оценке влияния 322 на клеточную чувствительность к этопозиду (фиг. 7G), хотя степень сенсибилизации была снижена по сравнению с блеомицином и IR. Это может быть функцией того, насколько важен Ku-зависимый NHEJ для различных типов повреждений, вызванных разными агентами.Вместе эти данные демонстрируют, что Ku-DBi способны ингибировать ДНК-PKcs, снижать катализируемую NHEJ репарацию и в конечном итоге могут сенсибилизировать клетки к множеству агентов, индуцирующих ДНК DSB.

Повышенная эффективность HDR-опосредованного редактирования генов путем химического ингибирования Ku

Недавние исследования показали, что снижение активности NHEJ in vivo приводит к увеличению активности HDR, и это явление можно использовать для повышения эффективности HDR-опосредованной прецизионной геномной инженерии CRISPR / Cas9 (36–39).Чтобы исследовать влияние ингибиторов Ku на редактирование генома CRISPR / Cas9, была синтезирована донорная молекула, кодирующая GFP, и ген устойчивости к пуромицину, фланкированный последовательностью 800 п.н., гомологичной сайту разреза CRISPR в гене EMX1 (Sigma). Донор, gRNA, нацеленный на плазмиды EMX1 и Cas9, котрансфицировали в клетки h560 в присутствии и в отсутствие Ku-ингибитора 245 . Через 72 часа после трансфекции клетки разводили по одной клетке в 96-луночных планшетах, помещали в режим отбора пуромицина и культивировали до конфлюэнтности.Клетки собирали и выделяли геномную ДНК для анализа ПЦР. Для оценки гомологичной интеграции донорной молекулы использовали анализ соединительной ПЦР (рис. 8). Из 28 клонов, устойчивых к пуромицину после обработки носителем, 4 из них были положительными в отношении точной гомологичной интеграции трансгена (таблица 2). Напротив, 4 из 5 устойчивых к пуромицину клонов, полученных из клеток, обработанных 20 мкМ 245 , были положительными в отношении точной гомологичной интеграции трансгена (таблица 2).Эти результаты показывают, что обработка ингибитором Ku увеличивала эффективность опосредованной HDR вставки гена в DSB, созданный из CRISPR / Cas9, в 6 раз. Данные предполагают, что увеличение эффективности рекомбинации не обязательно является увеличением HDR, но уменьшением неточных событий интеграции. Эти данные свидетельствуют о том, что Ku-DBi может быть эффективным для уменьшения нецелевых, потенциально мутагенных событий, которые препятствуют терапевтическому применению, опосредованному CRISPR.

Рисунок 8.

Усиление вставки опосредованного HDR гена. ( A ) Схема эксперимента по внедрению гена. Донорская плазмида 5,2 т.п.н. была сконструирована со вставкой 2,2 т.п.н. для экспрессии GFP и придания устойчивости к пуромицину. Плечи гомологии длиной 800 п.н. включали с обоих концов для нацеливания вставки в геномный сайт EMX1. Праймеры для ПЦР были разработаны для обеспечения возможности амплификации левого и правого соединений для оценки точной вставки гена ( B ). Геномную ДНК анализировали на предмет точной вставки гена с помощью анализа in / out PCR с использованием праймеров, изображенных на панели (A).

Рисунок 8.

Усиление вставки опосредованного HDR гена. ( A ) Схема эксперимента по внедрению гена. Донорская плазмида 5,2 т.п.н. была сконструирована со вставкой 2,2 т.п.н. для экспрессии GFP и придания устойчивости к пуромицину. Плечи гомологии длиной 800 п.н. включали с обоих концов для нацеливания вставки в геномный сайт EMX1. Праймеры для ПЦР были разработаны для обеспечения возможности амплификации левого и правого соединений для оценки точной вставки гена ( B ). Геномную ДНК анализировали на предмет точной вставки гена с помощью анализа in / out PCR с использованием праймеров, изображенных на панели (A).

Таблица 2. Модуляция

Ku-DBi инсерции гена, опосредованного CRISPR / cas9

.0 Ku-DBi-модуляция вставки гена, опосредованного CRISPR / cas9

. Автомобиль . Ku-DBi 245 .
Выделенные клоны 28 5
Положительные клоны ПЦР 4 4
Эффективность вставки (%) 80270
Автомобиль . Ku-DBi 245 .
Выделенные клоны 28 5
ПЦР-положительные клоны 4 4
Эффективность вставки (%) 14
14
. 4). Было показано, что это антитело является хорошим средством доставки цитотоксических препаратов в несколько различных линий раковых клеток, например, для рак поджелудочной железы, груди, простаты и колоректальный рак (Fransson, 2006). Радиоактивно меченые mAb INCA-X могут эффективно нацеливаться на антиген Ku70 / Ku80 в ксенотрансплантатах рака простаты у мышей, которые сначала получают предварительную дозу немеченых антител (Axelsson, 2013).Это антитело также использовалось в исследованиях, связанных с визуализацией антител при раке простаты. 111In-меченый INCA-X (111In-DTPA-INCA-X антитело) был использован для оценки нацеливания на опухоли in vivo и ex vivo и биораспределения у NMRI-голых мышей с ксенотрансплантатами PC-3, PC-3M-Lu2 или DU145 человека ( Аксельссон, 2014).

Антитела, впервые опубликованные в: Fransson et al. Белок репарации ядерной ДНК Ku70 / 80 представляет собой опухоль-ассоциированный антиген, проявляющий быстрый рецепторно-опосредованный эндоцитоз.Int. Дж. Рак (2006): 119 (10), 2492–2496. PMID: 164

Возвращение Четверг 4.25.13 Джим Зауэр (плавание и дайвинг) 1978-80 — Канзас Джейхокс

25 апреля 2013 г.

Джим Зауэр приехал плавать в Канзасский университет в 1978 году после перевода из Университета Нью-Мексико. В течение своего времени представляя Crimson and Blue, Зауэр участвовал в двух чемпионатах конференций Большой восьмерки в 1978 и 1979 годах.Во время своего пребывания в команде по плаванию Зауэр был со-капитаном в 1978-80 годах, а также был признан трехкратным чемпионом Большой восьмерки, выиграв 100 баттерфляем в 1979 году и 400-смешанную эстафету в 1979 и 1980 годах. В 1980 году, получив степень в области образования и административного отдыха, Зауэр занялся продажами высоких технологий с такими компаниями, как Xerox и Dell, для которых он объездил всю страну.

Студент-спортсмен в KU оставил заметный след в жизни Зауэра. КУ — не только его альма-матер, но и место, где он встретил свою 33-летнюю жену на свидании вслепую.Вместе у Зауэра и его жены Айлан двое детей, Коллин и Кевин, которые в настоящее время учатся в юридической школе Университета Калифорнии, и двое внуков. Зауэр ушел на пенсию в Остине, штат Техас, и вернулся к плаванию и тренировкам. Также он участвует в триатлоне. В эту пятницу ему исполняется 56 лет.

Почему вы решили переехать из Нью-Мексико в КУ?
«Нью-Мексико фактически избавлялось от своей программы плавания, потому что их тренер ушел. В 1977 году мой старый тренер, за которого я плавал, стал тренером в KU.Я написал ему по электронной почте, спрашивая, могу ли я идти дальше, потому что я уже был в красной рубашке один год. Он сказал: «Да, конечно, иди». Затем в конце семестра он дал мне стипендию. Так что все сработало очень хорошо ».

Что вас привлекло в KU?
«Летом 1977 года я отправился навестить своего отца в Чикаго. По пути из Нью-Мексико в Чикаго я остановился в кампусе Калифорнийского университета. Я провел около полдня, гуляя и осматривая кампус.Я пошел в тренажерный зал Робинсон и посмотрел на бассейн. Я подумал про себя, что это действительно невероятно красивый кампус. Я понял, что хочу там учиться. Посмотрев на кампус и познакомившись с тренером по плаванию, я убедил себя, что хочу поступить в KU ».

Что вам больше всего понравилось в карьере спортсмена в KU?
«Мне понравились дух товарищества и командная атмосфера, которые были у нас в KU. Университет Канзаса имеет очень богатые традиции мужского плавания. Они выиграли много чемпионатов подряд, что сделало их традицией в «Большой восьмерке».Мне всегда нравилось быть частью команды и быть с парнями. Команда по плаванию походила на наше братство ».

Какое воспоминание о плавании вам больше всего запомнилось?
«Я думаю, это было, когда мы выиграли чемпионат Большой восьмерки весной 1979 года. Мы выиграли как команда, и мне посчастливилось выиграть 100 баттерфляем в том же году, и я также участвовал в победе в эстафете с 400 комплексами. . Вся наша команда в тот год побрила головы, даже тренер. Наш тренер сказал нам, что если мы выиграем комплексную эстафету, он побреет голову, и мы выиграли эстафету.В тот год это был довольно насыщенный опыт ».

Каким был весь опыт работы в команде в KU?
«Мне всегда нравились тренировки, тренировки и все поездки, которые мы совершали. Мы поедем в Миссури поплавать. Это не походило на баскетбольную команду, собирающуюся в Миссури, но это было довольно близко. Когда Миссури приезжал к Лоуренсу, чтобы соревноваться, или мы ехали туда, чтобы соревноваться, всегда была особая атмосфера. Соперничество было довольно напряженным, и это было очень весело. У меня остались прекрасные воспоминания о соревнованиях с Миссури из-за соперничества между Кью и Миссури.”

Достигалось ли когда-нибудь плавание против Миссури?
«Было много аплодисментов. Мы били их каждый раз, когда плыли против них. Я уверен, что там было много ерунды, но я не могу вспомнить конкретный комментарий. Между нами и Миссури не было любви. Это забавно, потому что соперничество всегда остро, будь то баскетбол, футбол, плавание или легкая атлетика ».


Каким был студенческий аспект студенческой жизни в KU?

«Мне понравилось.Я ходил на много уроков психологии. Я в основном жил во Фрейзер-холле. Почти все мои занятия были во Фрейзере. У меня остались прекрасные воспоминания о прогулках от Башен Джейхок, прогулках по кампусу и тусовкам на пляже Уэско. Мне всегда нравилась студенческая сторона того, что я был студентом-спортсменом. Я бы не сказал, что был отличным учеником, но со мной все было в порядке. Я определенно не относился к категории учеников моего сына, учитывая, что он учится на юридическом факультете ».

Что было самым сложным в жизни студента-спортсмена?
«Думаю, я бы сказал, что управление своим временем было самой сложной частью.Мы выполнили 11 тренировок в течение недели и два дня в неделю тренировок с отягощениями. Мне приходилось управлять всеми классами в течение часов после всех практик, так что с этим было немного сложно справиться. Самым сложным было, наверное, просто составить расписание и выполнить домашнее задание ».

Что запомнилось вам больше всего за пределами Jayhawks?
«Я думаю, это была встреча с моей женой на свидании вслепую. Нас подставил парень из команды по плаванию, и он и его девушка устроили нам свидание вслепую.Они устроили нас на Mass Street Run, где в каждом баре на Массачусетс-стрит по сути разливают по пиву. Я никогда не забуду ту ночь. Я женат на своей жене уже почти 33 года, и все началось на свидании вслепую на Масс-стрит ».

Чем вы в итоге стали заниматься после окончания учебы?
«Так как я окончил среднюю школу в северной Калифорнии, я спросил свою будущую жену, не хочет ли она переехать со мной в Калифорнию, потому что у меня есть друг, и мы можем найти работу.Мы переехали в район Сан-Франциско без работы. Я пытался тренировать плавание, но у меня ничего не вышло. В итоге я работал в сфере продаж высоких технологий в таких компаниях, как Xerox и Dell. Я много путешествовал, и мне это очень понравилось ».

Что вам больше всего понравилось в карьере?
«Больше всего в моей карьере мне больше всего нравится путешествовать. Я много путешествовал по стране по работе. Я был практически во всех штатах, кроме Дакоты и Аляски.”

Как вы проводите пенсию?
«Около трех лет назад я вернулся в плавание. Сейчас занимаюсь мастерским плаванием. Я возвращаюсь к тренировкам, и чувствую себя прекрасно. Я также занимался триатлоном. Это просто показывает, что вы никогда не слишком стары, чтобы продолжать заниматься любимым делом ».

Что вы можете посоветовать нынешним и будущим студентам-спортсменам?
«Я бы сказал, чтобы хорошо распорядиться своим временем и получить степень.Сосредоточьтесь на своем спорте и своем образовании, наверное, лучший совет, который я могу дать ».

Intellian v80G VSAT система Ku-диапазона 83 см X-pol и Co-pol 8 Вт Ext Buc

Intellian v80G VSAT система Ku-диапазона 83 см X-pol и Co-pol 8 Вт Ext Buc

Магазин не будет работать корректно в случае, если куки отключены.

Похоже, в вашем браузере отключен JavaScript. Для максимально удобной работы с нашим сайтом обязательно включите Javascript в своем браузере.

  • Home
  • Intellian v80G VSAT система Ku-диапазона 83 см X-pol и Co-pol 8 Вт Ext Buc
  • Собственный глобальный блок Ku-диапазона PLL LNB
  • с ФАПЧ от Intellian
  • По характеристикам радиочастоты такие же, как у большинства обычных антенн длиной 1 м при размере 80 см
  • Удаленное управление с помощью Aptus Web. ACU с поддержкой Wi-Fi для локального управления с помощью Aptus Mobile или ПК
  • Комбинированный сигнал питания BUC и TX для уменьшения количества системных кабелей
  • Возможность поиска спутников без гироскопа без ввода с судового компаса
  • Dual VSAT Mediator объединяет две антенны VSAT для борьбы с зонами блокировки на борту
  • Сократите время установки и количество посещений для обслуживания с помощью автоматической диагностики
  • Архитектура системы с открытой платформой работает со всеми ведущими поставщиками услуг Ku-диапазона
  • 3-летняя глобальная гарантия, подтвержденная более чем 300 центрами обслуживания и поддержки Intellian по всему миру

Intellian v80G — самая маленькая антенна, которая работает без потребности в спутниковой сети с расширенным спектром.Это обеспечивает компактную систему, способную работать как в сетях TDMA, так и в сетях SCPC

.

Превосходная производительность слежения

Конструкция РЧ-характеристик с более высоким коэффициентом усиления, которая почти равна антенной системе VSAT 1-метрового уровня, позволяет антенне работать на периферии зоны покрытия сигнала, повышая надежность, когда сигнал имеет наибольшее значение.

Благодаря 3-осевой стабилизации v80G обеспечивает превосходные характеристики отслеживания, идеально подходящие для оффшорных судов, коммерческих судов и нефтегазовой промышленности, а также для критически важных операций, таких как наблюдение или мониторинг судов, где требуется бесперебойная связь.

Запатентованная RF технология

v80G включает в себя запатентованные Intellian LNB Global PLL, поддерживающие неограниченное количество частот гетеродина, как x-pol, так и co-pol подачи, и предлагает варианты BUC от 4 Вт до 16 Вт. Это идеальная система для судов, которым требуется высота антенны 1 м при более компактных размерах, а также простая установка, простота эксплуатации и надежная доступность для удаленного обслуживания.

v80G подает питание BUC, используя сигнальный кабель TX, непосредственно от ACU, уменьшая количество антенных кабелей, которые нужно прокладывать, при сохранении превосходной линейности сигнала и избегая общих проблем, связанных с объединением сигналов в один кабель.

Особенности системы Intellian v80G VSAT в Ku-диапазоне
  • Собственная глобальная система ФАПЧ в Ku-диапазоне от Intellian LNB
  • По характеристикам радиочастоты такие же, как у большинства обычных антенн длиной 1 м при размере 80 см
  • Удаленное управление с помощью Aptus Web. ACU с поддержкой Wi-Fi для локального управления с помощью Aptus Mobile или ПК
  • Комбинированный сигнал питания BUC и TX для уменьшения количества системных кабелей
  • Возможность поиска спутников без гироскопа без ввода с судового компаса
  • Dual VSAT Mediator объединяет две антенны VSAT для борьбы с зонами блокировки на борту
  • Сократите время установки и количество посещений для обслуживания с помощью автоматической диагностики
  • Архитектура системы с открытой платформой работает со всеми ведущими поставщиками услуг Ku-диапазона
  • 3-летняя глобальная гарантия, подтвержденная более чем 300 центрами обслуживания и поддержки Intellian по всему миру

Характеристики системы Intellian 80G VSAT в Ku-диапазоне:
  • Удаленный доступ через Aptus Web
    • Встроенный веб-интерфейс: удаленное обновление, автоматическая диагностика
    • Доступ ко всем бортовым антеннам Intellian (включая TVRO) через бортовую сеть
  • Global Operation, одна антенна
    • Стандартный, оснащенный запатентованным Intellian Global PLL LNB, способный принимать полный диапазон рабочих частот от любого спутника VSAT по всему миру
    • Все VSAT-антенны Intellian совместимы с Co-pol и X-pol
  • Работа без гироскопа
    • Не требуется ввода от устройства определения курса судна
    • Быстрая установка для сокращения времени установки.

      Добавить комментарий

      Ваш адрес email не будет опубликован.

. Автомобиль . Ku-DBi 245 .
Выделенные клоны 28 5
Положительные клоны ПЦР 4 4
Эффективность вставки (%) 80270
Автомобиль . Ku-DBi 245 .
Выделенные клоны 28 5
ПЦР-положительные клоны 4 4
Эффективность вставки (%) USION

NHEJ является преобладающим путем репарации DSB в клетках человека, и, несмотря на важность этого клеточного пути, остается много вопросов, касающихся сложности молекулярных механизмов, управляющих NHEJ.Биохимические и структурные исследования подтверждают модель активации ДНК-ПК, вызванной прямым контактом с ДНК (40–42). Важность этого взаимодействия подтверждается данными, демонстрирующими, что структура и последовательность ДНК играют уникальную и важную роль в оптимальной активации ДНК-PK (20,22). Предыдущая работа показала, что гетеродимер Ku необходим для эффективного NHEJ и функционирует как каркас для связывания других белков NHEJ, включая формирование критического взаимодействия с DNA-PKcs (43). Кроме того, мы ранее показали, что карбоксиконцевой домен Ku80 (CTD) играет важную роль в активации ДНК-PK (44).Данные, представленные в этой рукописи, подтверждают важность связывания Ku-ДНК по отношению к активности киназы ДНК-PK, поскольку прямое химическое ингибирование активности связывания Ku-ДНК отменяет активность киназы (Рисунки 2, 4 и 5). Наша демонстрация прямого взаимодействия Ku-DBi и отсутствия связывания ингибитора с ДНК подтверждает вывод о том, что наши новые низкомолекулярные ингибиторы связываются с белком Ku, чтобы блокировать взаимодействие белок-ДНК.

Несмотря на достижения в понимании биохимической активации ДНК-PK, молекулярные механизмы, которые управляют выбором клеточного пути репарации DSB, остаются загадочными.В клетках, обработанных Ku-DBi, мы наблюдаем ингибирование аутофосфорилирования ДНК-PKcs в кластере Ser 2056 (Рисунок 7), и это приводит к ингибированию катализированной репарации NHEJ (Рисунок 6) и повышенной клеточной чувствительности к различным индуцирующим DSB. лечения (рис. 7E – G). Наличие химических ингибиторов, активных в клетках для нацеливания на определенные этапы путей, позволит определить подробные механизмы передачи сигналов и восстановления.

Знание энзимологии путей репарации ДНК и механизмов, используемых для ответа на повреждение ДНК, привело к появлению ряда терапевтических средств, которые изменили клиническую помощь при раке.Повышенная эффективность восстановления DSB также является основным фактором устойчивости к химио- и лучевой терапии, а блокирование ДНК-PK-зависимой репарации, как было показано, увеличивает чувствительность к различным противораковым терапевтическим средствам. Таким образом, ингибиторы ДНК-PK в настоящее время оцениваются в сочетании с химио- и лучевой терапией, а также в качестве отдельных агентов при некоторых злокачественных опухолях с дефицитом репарации ДНК. Недавняя разработка более специфичных и мощных ингибиторов привела к одобрению FDA для начала клинических испытаний фазы I в качестве потенциального терапевтического средства против рака (45).Даже с учетом этих успехов в клинике, агенты, нацеленные на активные центры, имеют ограничения, включая специфичность из-за консервативных каталитических механизмов в семействе киназ, сходные структурные особенности активных центров и высокие внутриклеточные концентрации АТФ по сравнению с клеточными концентрациями ингибиторов киназ. Киназная активность, однако, остается только одной из биохимических активностей комплекса ДНК-PK, при этом связывание ДНК и поддержание межбелкового взаимодействия являются неотъемлемой частью его роли в репарации и DDR.Ингибирование этой активности путем нарушения взаимодействия Ku-ДНК представляет собой терапевтический путь, позволяющий избежать проблем, связанных с ингибиторами, нацеленными на активный центр киназ. Представленные здесь результаты однозначно показывают повышенную сенсибилизацию к повреждающим ДНК агентам блеомицину, этопозиду и IR (рис. 7) и представляют собой жизнеспособный класс молекул как для активности одного агента, так и для повышения эффективности повреждающих ДНК агентов в клинике. Уникальный механизм действия Ku-DBi в качестве ингибиторов ДНК-PK также предполагает, что механизмы устойчивости менее вероятны по сравнению с ингибиторами киназ, нацеленными на активный сайт, где устойчивость слишком распространена (46).Уникальная структура гетеродимера Ku и отсутствие избыточных белков для компенсации предвестника потери Ku для эффективного терапевтического средства, основанного на активности Ku-DBi. Анализ специфичности соединений показал, что они действительно высокоспецифичны, и лишь несколько киназ демонстрируют перекрестную реактивность при высоких концентрациях. Одна из этих киназ, PIM1, как известно, играет роль в прогрессировании клеточного цикла и апоптозе (33). Хотя формально возможно, что наблюдаемый клеточный эффект частично опосредован ингибированием PIM1, наши данные, демонстрирующие, что Ku-нулевые клетки нечувствительны к аргументам Ku-DBi, свидетельствуют о том, что ингибирование PIM1 способствует наблюдаемым клеточным эффектам.

Способность ингибировать начальное событие связывания ДНК, вероятно, выявляет дополнительные сложности, связанные с выбором пути репарации двухцепочечного разрыва, поскольку наличие белка, присутствующего, но неактивного на концах, несомненно, отличается от того, когда что-либо не связано с концом. Ингибируя начальное молекулярное событие в пути NHEJ, Ku взаимодействует с концами ДНК, может эффективно блокировать репарацию, катализируемую NHEJ, и, как ожидается, будет управлять процессинговыми ферментами, чтобы разрешить события рекомбинации, опосредованные HDR (36).Демонстрация переключения в выборе пути, обусловленного Ku-DBi, наблюдалась, поскольку эффективность HDR-опосредованной вставки гена CRISPR большой молекулы-донора была увеличена в 6 раз, как измерено точными результатами рекомбинации, по сравнению с контролем. Этот результат показывает, что ингибирование связывания Ku-ДНК увеличивает эффективность нацеливания в экспериментах по геномной инженерии, по крайней мере, в 6 раз по сравнению с другими существующими методами усиления, включая химическое ингибирование ДНК-PKcs и лигазы IV (38,39). Дополнительным препятствием в области геномной инженерии является ошибочная природа NHEJ, которая приводит к небольшим вставкам и делециям в DSB ДНК в геномной ДНК.Это движущий механизм нецелевых эффектов, наблюдаемых с помощью сконструированных нуклеаз, используемых для точной геномной инженерии (47). Хорошо известно, что случайная вставка молекулы дцДНК, метод, используемый для создания стабильно трансфицированных клеточных линий в течение десятилетий, осуществляется NHEJ (47-51). Эта вставка нецелевого гена также может привести к увеличению количества неотредактированных клеток в большей популяции клеток, обработанных CRISPR, что иногда приводит к значительно большему количеству образцов, которые исследователь может проверять или анализировать на предмет наличия клетки. с конкретным редактированием.Запрещение NHEJ должно уменьшить количество этих неспецифических событий редактирования. Более низкое количество общих устойчивых к пуромицину клональных экспансий, наблюдаемых в клетках, обработанных Ku-DBi (таблица 2), вероятно, является результатом уменьшения нецелевого встраивания донорной молекулы, активности, которая обычно обусловлена ​​активностью NHEJ. Нацеливание на более поздние стадии этого пути, включая активность киназы ДНК-PK и активность лигазы IV, преследуется с помощью химических ингибиторов и может уменьшить NHEJ. Интересно, что несколько групп также сообщили о незначительном влиянии ингибитора лигазы IV, SCR7, на эксперименты по геномной инженерии (52,53), подчеркивая необходимость в более эффективных, более мощных и специфических агентах, которые могут влиять на опосредованную HDR вставку гена.В общем, использование Ku-DBi для улучшения геномной инженерии применимо к широкому спектру клеточных модельных систем. Преимущество таргетинга на Ku состоит в том, что DSB остается необработанным и пригодным для использования HDR и, таким образом, представляет собой истинное увеличение количества ячеек, способных к активности HDR. Следовательно, клетки, которые не были репарированы NHEJ и не задействованы в системе HDR, предназначены для гибели клеток, что приводит к повышенной способности идентифицировать и размножать клетки с желаемой генетически модифицированной последовательностью.

На сегодняшний день единственная запись ингибитора, нацеленного на белок Ku, является результатом скрининга in silico коммерческой библиотеки (54) и идентифицирует каркас ядра, который может быть полезен для генерации новых молекул. Однако их лучшее соединение ингибирует только в среднем микромолярном диапазоне, и его способность блокировать репарацию DSB ДНК, катализируемую NHEJ, на сегодняшний день не документирована. Для сравнения, наша основная структура полностью отличается (рисунок 1 и таблица 1), и наш подход к синтетической медицинской химии привел к синтезу подобных лекарству молекул с высокой эффективностью и специфичностью по отношению к Ku и превосходными химическими свойствами, включая растворимость и стабильность (данные не показано).Представленные здесь исследования подтверждают модель, в которой молекулы ингибируют взаимодействие Ku-ДНК путем прямого связывания с белком Ku и конкурентного блокирования его ассоциации с ДНК. Кроме того, результаты в клетках с дефицитом Ku не только подтверждают специфичность, но также указывают на то, что клеточные эффекты являются функцией ингибирования Ku. Вместе эти результаты поддерживают разработку нового класса молекул, которые сильно ингибируют NHEJ посредством прямого нарушения взаимодействия Ku-ДНК. Такие молекулы могут быть полезны как для фундаментальных научных исследований, так и для терапевтических и коммерческих разработок.

ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ДАННЫЕ

Дополнительные данные доступны в NAR Online.

БЛАГОДАРНОСТИ

Авторы благодарят Центр комплексной химической генетики им. И.Ю. Саймона и Пэт Смит за помощь в проточной цитометрии.

ФИНАНСИРОВАНИЕ

Национальные институты здравоохранения [R43CA221562, R43GM119880 до K.S.P .; R01 CA247370, выданный N.S.G., J.J.T.]; Американское онкологическое общество [ACSMRSG-15-163-01 до C.Р.С.]; Фонд семьи Тома и Джули Вуд; NN поддерживается грантом на обучение NIH T32HL0

. Финансирование платы за открытый доступ: Фонд семьи Тома и Джули Вуд.

Заявление о конфликте интересов . Авторы заявляют о наличии следующих конкурирующих финансовых интересов: Дж. Турчи является соучредителем и CSO NERx Biosciences и соавтором патентов на соединения, описанные в этой рукописи.

ССЫЛКИ

1.

Авраам

Р.T.

Киназы, родственные PI 3-киназе: «крупные» игроки в индуцированных стрессом сигнальных путях

.

Восстановление ДНК (Amst.)

.

2004

;

3

:

883

887

.2.

Mohiuddin

I.S.

,

Канг

M.H.

ДНК-ПК как новая терапевтическая мишень при раке

.

Передний Онкол.

2019

;

9

:

635

.3.

Либер

М.R.

Механизм репарации двухцепочечных разрывов ДНК по пути негомологичного соединения концов ДНК

.

Annu. Rev. Biochem.

2010

;

79

:

1

31

.4.

Wang

Y.

,

Ghosh

G.

,

Hendrickson

E.A.

Ku86 репрессирует события летальных делеций теломер в соматических клетках человека

.

Proc. Natl. Акад. Sci. США

.

2009

;

106

:

12430

12435

.5.

Ruis

B.L.

,

Фаттах

K.R.

,

Хендриксон

E.A.

Каталитическая субъединица ДНК-зависимой протеинкиназы регулирует пролиферацию, длину теломер и стабильность генома в соматических клетках человека

.

Мол. Cell Biol.

2008

;

28

:

6182

6195

.6.

Sui

J.

,

Zhang

S.

,

Chen

B.ПК.

ДНК-зависимая протеинкиназа в поддержании и защите теломер

.

Cell Mol. Биол. Lett.

2020

;

25

:

2

.7.

Damia

G.

Нацеливание ДНК-PK при раке

.

Mutat. Res.

2020

;

821

:

111692

.8.

Goodwin

J.F.

,

Knudsen

K.E.

Помимо восстановления ДНК: функция ДНК-PK при раке

.

Рак Discov.

2014

;

4

:

1126

1139

.9.

Davidson

D.

,

Amrein

L.

,

Panasci

L.

,

Aloyz

R.

Малые молекулы, ингибиторы ДНК-PK, направленные на восстановление ДНК и не только

.

Front Pharmacol.

2013

;

4

:

5

.10.

Стачелек

G.C.

,

Петерсон-Рот

E.

,

Liu

Y.

,

Fernandez

R.J.

III,

Щука

L.R.

,

Qian

J.M.

,

Abriola

L.

,

Hoyer

D.

,

Hungerford

W.

,

Merkel

J.

et al. .

YU238259 представляет собой новый ингибитор гомологически зависимой репарации ДНК, который проявляет синтетическую летальность и радиосенсибилизацию в опухолях с дефицитом репарации

.

Мол. Cancer Res.

2015

;

13

:

1389

1397

.11.

Weber

A.M.

,

Райан

А.Дж.

ATM и ATR как терапевтические мишени при раке

.

Pharmacol. Ther.

2015

;

149

:

124

138

.12.

Ciszewski

W.M.

,

Tavecchio

M.

,

Dastych

J.

,

Curtin

N.J.

Ингибирование ДНК-ПК с помощью NU7441 сенсибилизирует клетки рака груди к ионизирующему излучению и доксорубицину

.

Breast Cancer Res. Удовольствие.

2014

;

143

:

47

55

. 13.

Furgason

J.M.

,

Bahassi

e.M.

Механизмы восстановления ДНК при раке

.

Pharmacol. Ther.

2013

;

137

:

298

308

.14.

Abuzeid

W.M.

,

Jiang

X.

,

Shi

G.

,

Wang

H.

,

Paulson

D.

,

Araki

K.

,

Jungreis D.

Карни

Дж.

,

О’Мэлли

BW

Jr.,

Li

D.

Молекулярное разрушение RAD50 повышает чувствительность опухолевых клеток человека к химиотерапии на основе цисплатина

.

J. Clin. Инвестируйте

.

2009

;

119

:

1974

1985

.15.

Гаванде

Н.С.

,

VanderVere-Carozza

P.S.

,

Hinshaw

H.D.

,

Jalal

S.I.

,

Sears

C.R.

,

Pawelczak

K.S.

,

Турчи

J.J.

Таргетная терапия восстановления ДНК: прошлое или будущее лечения рака

.

Pharmacol. Ther.

2016

;

160

:

65

83

0,16.

Джекимов

C.

,

Bolderson

E.

,

Suraweera

A.

,

Adams

M.

,

O’Byrne

K.J.

,

Ричард

Д.Дж.

Химиотерапевтические соединения, направленные на пути репарации двухцепочечных разрывов ДНК: хорошие, плохие и многообещающие

.

Передний Онкол.

2014

;

4

:

86

. 17.

Walker

J.R.

,

Corpina

R.A.

,

Goldberg

J.

Структура гетеродимера Ku, связанного с ДНК, и его значение для репарации двухцепочечных разрывов

.

Природа

.

2001

;

412

:

607

614

0,18.

Friesner

R.A.

,

Мерфи

р.Б.

,

Репаски

М.П.

,

Frye

L.L.

,

Greenwood

J.R.

,

Halgren

T.A.

,

Саншагрин

P.C.

,

Mainz

D.T.

Глайд повышенной точности: стыковка и подсчет очков, включающая модель гидрофобной оболочки для комплексов белок-лиганд

.

J. Med. Chem.

2006

;

49

:

6177

6196

.19.

Смитон

М.Б.

,

Миллер

П.С.

,

Ketner

G.

,

Hanakahi

L.A.

Мелкомасштабные экстракты для исследования эксцизионной репарации нуклеотидов и негомологичного соединения концов

.

Nucleic Acids Res.

2007

;

35

:

e152

.20.

Pawelczak

K.S.

,

Турчи

J.J.

Механизм активации ДНК-ПК, требующий уникальных вкладов от каждой цепи конца ДНК и последствий для опосредованного микрогомологией негомологичного соединения концов ДНК

.

Nucleic Acids Res.

2008

;

36

:

4022

4031

. 21.

Гаванде

Н.С.

,

VanderVere-Carozza

P.

,

Mishra

A.K.

,

Vernon

T.L.

,

Pawelczak

K.S.

,

Турчи

J.J.

Дизайн и разработка с учетом структуры новых ингибиторов взаимодействия белка xeroderma pigmentosum группы a (XPA) с ДНК

.

J. Med. Chem.

2017

;

60

:

8055

8070

. 22.

Pawelczak

K.S.

,

Andrews

B.J.

,

Turchi

J.J.

Дифференциальная активация ДНК-ПК на основе ориентации цепи ДНК и смещения последовательности

.

Nucleic Acids Res.

2005

;

33

:

152

161

. 23.

Нил

Дж. А.

,

Сугиман-Марангос

S.

,

VanderVere-Carozza

P.

,

Wagner

M.

,

Turchi

J.

,

Lees-Miller

S.P.

,

Junop

M.S.

,

Meek

K.

Раскрытие сложностей аутофосфорилирования ДНК-зависимой протеинкиназы

.

Мол. Cell Biol.

2014

;

34

:

2162

2175

. 24.

Мартинес

М.Д.

,

Джафари

Р.

,

Игнатущенко

М.

,

Секи

Т.

,

Ларссон

Е.А.

,

Dan

C.

,

Sreekumar

L.

,

Cao

Y.

,

Nordlund

P.

Мониторинг вовлечения лекарственной мишени в клетки и ткани с помощью анализа клеточного теплового сдвига

.

Наука

.

2013

;

341

:

84

87

.25.

Zegzouti

H.

,

Zdanovskaia

M.

,

Hsiao

K.

,

Goueli

S.A.

ADP-Glo: A Bioluminescent Assases

для гомогенного мониторинга ADP-Glo: A Bioluminescent

Анализ. Drug Dev. Technol.

2009

;

7

:

560

572

. 26.

Нуссенцвейг

А.

,

Сокол

К.

,

Бургман

П.

,

Li

L.

,

Li

G.C.

Повышенная чувствительность Ku80-дефицитных клеточных линий и мышей к повреждению ДНК: влияние ионизирующего излучения на рост, выживание и развитие

.

Proc. Natl. Акад. Sci. США

1997

;

94

:

13588

13593

. 27.

Neher

T.M.

,

Bodenmiller

D.

,

Fitch

R.W.

,

Jalal

S.I.

,

Турчи

J.J.

Новые необратимые низкомолекулярные ингибиторы репликационного белка А проявляют активность одного агента и действуют синергично с цисплатином

.

Мол. Рак Тер.

2011

;

10

:

1796

1806

. 28.

Sears

C.R.

,

Turchi

J.J.

Повреждения, связанные с комплексным цисплатином с двойным разрывом цепи (DSB), непосредственно нарушают клеточное негомологичное соединение концов (NHEJ) независимо от нижестоящих путей ответа на повреждение (DDR)

.

J. Biol. Chem.

2012

;

287

:

24263

24272

. 29.

Pawelczak

K.S.

,

Гаванде

Н.С.

,

VanderVere-Carozza

P.S.

,

Турчи

J.J.

Модуляция путей репарации ДНК для повышения точности геномной инженерии

.

ACS Chem. Биол.

2018

;

13

:

389

396

.30.

Скалли

р.

,

Panday

A.

,

Elango

R.

,

Willis

N.A.

Выбор пути репарации двухцепочечных разрывов ДНК в соматических клетках млекопитающих

.

Nat. Rev. Mol. Cell Biol.

2019

;

20

:

698

714

. 31.

Гаванде

Н.С.

,

VanderVere-Carozza

P.S.

,

Pawelczak

K.S.

,

Вернон

Т.L.

,

Jordan

M.R.

,

Turchi

J.J.

Оптимизация на основе структуры ингибиторов взаимодействия белок А (RPA) -ДНК

.

ACS Med. Chem. Lett.

2020

;

11

:

1118

1124

. 32.

Toure

B.B.

,

Giraldes

J.

,

Smith

T.

,

Sprague

E.R.

,

Wang

Y.

,

Матье

S.

,

Chen

Z.

,

Mishina

Y.

,

Feng

Y.

,

Yan-Neale

Y.

et al. .

На пути к валидации киназы лейциновой молнии материнского эмбриона: открытие, оптимизация высокоэффективных и селективных ингибиторов и предварительное понимание биологии

.

J. Med. Chem.

2016

;

59

:

4711

4723

.33.

Haddach

M.

,

Michaux

J.

,

Schwaebe

M.K.

,

Pierre

F.

,

O’Brien

S.E.

,

Borsan

C.

,

Tran

J.

,

Raffaele

N.

,

Ravula

S.

,

Drygin

D.

et al. .

Открытие CX-6258. мощный, селективный и эффективный при пероральном приеме ингибитор пан-Pim киназ

.

ACS Med. Chem. Lett.

2012

;

3

:

135

139

. 34.

Razmazma

H.

,

Ebrahimi

A.

,

Hashemi

M.

Структурные идеи для рационального дизайна новых ингибиторов киназы PIM-1 на основе 3,5-дизамещенных производных индола: Вычислительный подход

.

Comput. Биол. Med.

2020

;

118

:

103641

.35.

Woods

D.S.

,

Sears

C.R.

,

Turchi

J.J.

Распознавание концов ДНК С-концевой областью Ku80 и каталитической субъединицей ДНК-зависимой протеинкиназы

.

PLoS One

.

2015

;

10

:

e0127321

.36.

Пирс

А.Дж.

,

Hu

P.

,

Han

M.

,

Ellis

N.

,

Jasin

M.

Ku-белок, связывающий конец ДНК, модулирует гомологичную репарацию двухцепочечных разрывов в клетках млекопитающих

.

Genes Dev.

2001

;

15

:

3237

3242

0,37.

Ma

Y.

,

Chen

W.

,

Zhang

X.

,

Yu

L.

,

Dong

W.

,

Pan

S.4 Гао

С.

,

Huang

X.

,

Zhang

L.

Повышение эффективности CRISPR / Cas9-опосредованного точного редактирования генома у крыс путем ингибирования NHEJ и использования белка Cas9

.

РНК Biol.

2016

;

13

:

605

612

0,38.

Маруяма

Т.

,

Дуган

S.K.

,

Truttmann

M.C.

,

Билате

А.М.

,

Инграм

Дж.R.

,

Ploegh

H.L.

Повышение эффективности точного редактирования генома с помощью CRISPR-Cas9 путем ингибирования негомологичного соединения концов

.

Nat. Biotechnol.

2015

;

33

:

538

542

. 39.

Robert

F.

,

Barbeau

M.

,

Ethier

S.

,

Dostie

J.

,

Pelletier

PK

Фармакологическое ингибирование ДНК-стимуляторов -опосредованное редактирование генома

.

Genome Med.

2015

;

7

:

93

.40.

Gupta

S.

,

Meek

K.

Богатая лейцином область ДНК-PKcs способствует его врожденной аффинности к ДНК

.

Nucleic Acids Res.

2005

;

33

:

6972

6981

.41.

Pawelczak

K.S.

,

Bennett

S.M.

,

Турчи

J.J.

Координация активации ДНК-ПК и нуклеазного процессинга концов ДНК в NHEJ

.

Антиоксид. Редокс. Сигнал.

2011

;

14

:

2531

2543

.42.

Serrano-Benitez

A.

,

Cortes-Ledesma

F.

,

Ruiz

JF

«Конец средства»: как структура конца ДНК формирует процесс восстановления двухцепочечных разрывов

.

Передняя Мол. Biosci.

2019

;

6

:

153

.43.

Gell

D.

,

Jackson

S.P.

Картирование белок-белковых взаимодействий внутри ДНК-зависимого протеинкиназного комплекса

.

Nucleic Acids Res.

1999

;

27

:

3494

3502

. 44.

Беннет

S.M.

,

Woods

D.S.

,

Pawelczak

K.S.

,

Турчи

Дж.J.

Множественные взаимодействия белок-белок в комплексе ДНК-PK опосредуются С-концом Ku 80

.

Внутр. J. Biochem. Мол. Биол.

2012

;

3

:

36

45

. 45.

Zenke

F.T.

,

Zimmermann

A.

,

Sirrenberg

C.

,

Dahmen

H.

,

Kirkin

V.

,

Pehl

U.

,

T.

,

Wilm

C.

,

Fuchss

T.

,

Amendt

C.

et al. .

Фармакологический ингибитор ДНК-ПК, M3814, усиливает лучевую терапию и регрессирует опухоли человека на моделях мышей

.

Мол. Рак Тер.

2020

;

19

:

1091

1101

. 46.

Тан

C.S.

,

Kumarakulasinghe

N.B.

,

Хуан

Ю.Q.

,

Ang

Y.L.E.

,

Чу

J.R.

,

Goh

до н.э.

,

Soo

R.A.

TKI EGFR третьего поколения: текущие данные и будущие направления

.

Мол. Рак

.

2018

;

17

:

29

, 47.

Guirouilh-Barbat

J.

,

Huck

S.

,

Bertrand

P.

,

Pirzio

L.

,

Desmaze

C.

,

Sabatier

L.

,

Lopez

B.S.

Влияние пути KU80 на NHEJ-индуцированные перестройки генома в клетках млекопитающих

.

Мол. Ячейка

.

2004

;

14

:

611

623

. 48.

Bachu

R.

,

Bergareche

I.

,

Chasin

L.A.

CRISPR-Cas нацеленная интеграция плазмиды в клетки млекопитающих через негомологичное соединение конца

.

Biotechnol. Bioeng.

2015

;

112

:

2154

2162

. 49.

Ghezraoui

H.

,

Piganeau

M.

,

Renouf

B.

,

Renaud

JB

,

Sallmyr

A.

,

Ohis

,

S.

,

Tomkinson

AE

,

Hendrickson

EA

,

Джованнанджели

C.

et al. .

Хромосомные транслокации в клетках человека генерируются каноническим негомологичным соединением концов

.

Мол. Ячейка

.

2014

;

55

:

829

842

.50.

Saito

S.

,

Maeda

R.

,

Adachi

N.

Двойная потеря человеческих POLQ и LIG4 отменяет случайную интеграцию

.

Nat. Commun.

2017

;

8

:

16112

.51.

Зеленский

А.Н.

,

Schimmel

J.

,

Kool

H.

,

Kanaar

R.

,

Tijsterman

M.

Инактивация Pol theta и C-NHEJ исключает внешнюю интеграцию ДНК

.

Nat. Commun.

2017

;

8

:

66

. 52.

Ян

D.

,

Scavuzzo

M.A.

,

Chmielowiec

J.

,

Sharp

R.

,

Bajic

A.

,

Borowiak

M.

Обогащение фазы клеточного цикла G2 / M в плюрипотентных стволовых клетках человека усиливает HDR-опосредованную репарацию гена с помощью настраиваемой эндонуклеазы

.

Sci. Отчет

2016

;

6

:

21264

.53.

Чжан

J.P.

,

Li

X.L.

,

Li

G.H.

,

Чен

Вт.

,

Arakaki

C.

,

Botimer

G.D.

,

Baylink

D.

,

Zhang

L.

,

Wen

W.

,

Fu 9.0007.

et al. .

Эффективный точный нокин с двойным разрезом донора HDR после CRISPR / Cas9-опосредованного расщепления двухцепочечной ДНК

.

Genome Biol.

2017

;

18

:

35

. 54.

Ветерингс

E.

,

Gallegos

A.C.

,

Dominick

L.N.

,

Кук

Л.С.

,

Бартельс

Т.Н.

,

Vagner

J.

,

Matsunaga

T.O.

,

Махадеван

D.

новый маломолекулярный ингибитор белка репарации ДНК Ku70 / 80

.

Восстановление ДНК (Amst)

.

2016

;

43

:

98

106

.

© Автор (ы) 2020.Опубликовано Oxford University Press от имени Nucleic Acids Research.

Intellian v80G Ku-диапазон с 83 см (32,7 дюйма) отражателем, X-pol и Co-pol, NJRC 8W Extended BUC и PLL LNB (V2-81-CJW1)

Intellian v80G Ku-band с 83 см (32,7 дюйма) отражателем , X-pol и Co-pol, NJRC 8W Extended BUC & PLL LNB (V2-81-CJW1)
Intellian v80G представляет собой полностью интегрированную 3-осевую стабилизированную морскую VSAT-систему в Ku-диапазоне 83 см, которая захватывает и фиксирует спутник не требуя отдельного ввода от судового гирокомпаса.Это обеспечивает надежное, постоянное широкополосное соединение в море.

Последнее решение от Intellian, v80G, можно настроить для спутниковых сетей TDMA или SCPC. Новый блок управления антенной (ACU) поддерживает доступ к Wi-Fi через ACU, а также доступ к USB-порту данных для обновлений и обслуживания, а встроенный модуль подключения Bluetooth внутри антенны может обеспечить удаленное подключение к ПК.

v80G подходит для высокоскоростного интернета, обновления прогнозов погоды, электронной почты, передачи файлов и изображений, видеоконференций, VoIP, VPN и резервного копирования баз данных.Конструкция с высокими радиочастотными характеристиками позволяет антенне работать на границе зоны покрытия сигнала с превосходными результатами. Двухсистемный посредник для расширенного резервирования и отказоустойчивых приложений также является опцией этой универсальной и инновационной системы связи VSAT.

Intellian v80G обладает неограниченным диапазоном азимута (без разворачивания кабеля), широким углом возвышения (от -15 ° до +100 °), предварительно запрограммированной глобальной спутниковой библиотекой, встроенным GPS, поиском без гироскопа и простые в использовании функции удаленного управления и обслуживания.Система связи VSAT v80G совместима с поставщиками услуг, использующими модемы iDirect, Hughes, Comtech и SatLink. Дополнительные модемные сети постоянно добавляются к нашему объему подключений.

Встроенный веб-интерфейс блока управления антенной (ACU) обеспечивает удаленный IP-доступ и диагностику системы, избавляя от необходимости присутствия инженера на судне для выполнения планового обслуживания и настройки параметров. Доступ к системным компонентам Intellian v-Series, их мониторинг и управление можно получить из любого веб-сайта в мире.Благодаря совместимости с Uplogix и OpenAMIP преимущества для конечных пользователей заключаются в снижении эксплуатационных расходов, более быстром решении при возникновении проблем и улучшении безопасности и соответствия требованиям по сравнению с централизованным управлением.

Сотни процедур обслуживания могут быть автоматизированы, например, обновление прошивки, отслеживание параметров, сброс системы и диагностика, включая журналы данных истории работы антенны.

v80G также поддерживает одно- или многодиапазонные LNB, как с перекрестной, так и с ко-поляризацией, и предлагает варианты BUC от 4 Вт до 8 Вт до мини 16 Вт.Он спроектирован и изготовлен в соответствии с отраслевыми и военными стандартами в отношении испытаний на вибрацию, удары и воздействия окружающей среды или даже превосходящих их, чтобы гарантировать надежность в сложных морских условиях.

Teledyne Paradise Datacom 80 Вт Ku-Band нитрид галлия (GaN) Ультра мини-компактный открытый SSPA

Teledyne Paradise Datacom X-Band 200 Вт с нитридом галлия (GaN) Mini Compact SSPA

Paradise Datacom S-Band Compact Outdoor SSPA

Teledyne Paradise Datacom 80W Ku-Band Gallium Nitride (GaN) Ultra Mini Compact Outdoor SSPA доступен для покупки пошагово по 1

Нитрид галлия для чрезвычайно высокой плотности мощности и надежности в Ku-диапазоне, выходная мощность 80 Вт в Ku-диапазоне

Ультра мини-компактный наружный блок из нитрида галлия (GaN) в Ku-диапазоне мощностью 80 Вт SSPA

Teledyne Paradise Datacom, 80 Вт, Ku-диапазонный миниатюрный твердотельный усилитель мощности с нитридом галлия для установки вне помещений (SSPA) создан для экстремальных условий окружающей среды и обеспечивает высокую надежность работы.Наряду с прочной конструкцией существует самая высокая удельная мощность в отрасли. Это позволяет использовать твердотельную технологию в приложениях, которые долгое время оставались зарезервированы для TWTA.

Усилители из нитрида галлия

предлагают значительно лучшие характеристики, чем традиционные решения на основе GaAs. GaN предлагает лучшую эффективность, чем другие традиционные технологии усилителя, а также демонстрирует исключительное усиление и мощность по частоте.

При весе менее 24,5 фунтов. (11,2 кг) и 19,6 фунта.(8,9 кг) для блоков Ku-диапазона мощностью 80 Вт и немного больше, чем коробка для завтрака, это семейство GaN SSPA доступно со следующими уровнями выходной мощности:

Диапазон C: 200 Вт

Диапазон X: 200 Вт

Ku-диапазон: 80 Вт

GaN SSPA Технические характеристики:

C-ДИАПАЗОН

ПАРАМЕТР

ПРИМЕЧАНИЯ

ПРЕДЕЛЫ

ЕДИНИЦ

Диапазон частот

(см. Варианты расширенного диапазона)

5.От 850 до 6,425

ГГц

Выходная мощность @: Psat / двухтональный линейный (типовой / гарантированный минимум)

HPACC3200AC_XXXX

Psat / PLinear 53,0 / 50,0 (200/100)

дБм (Вт)

Требования к питанию Линейное напряжение Линия Частота Линия питания

Коэффициент мощности

, скорректированный HPACC3200AC_XXXX @ Psat HPACC3200AC_XXXX @ PLinear

от 90 до 265 от 47 до 63 1100 880

В переменного тока Гц Вт Вт

Расширенный диапазон C 5.От 85 до 6,725 ГГц

Линейное снижение выходной мощности на 1,0 дБ в диапазоне от 6,425 до 6,725 ГГц

Х-БЕНД

ПАРАМЕТР

ПРИМЕЧАНИЯ

ПРЕДЕЛЫ

ЕДИНИЦ

Диапазон частот

7.900 до 8.400

ГГц

Выходная мощность @: Psat / двухтональный PLINEAR (типовой / гарантированный минимум)

HPAXX3200AC_XXXX

Psat / PLinear 53,0 / 50,0 (200/100)

дБм (Вт)

Требования к питанию Линейное напряжение Линия Частота Линия питания

Коэффициент мощности

, скорректированный HPAXX3200AC_XXXX @ Psat HPAXX3200AC_XXXX @ PLinear

от 90 до 265 от 47 до 63 1120 900

В переменного тока Гц Вт Вт

Полосовой фильтр передачи (опция)

Вносимая потеря

-0.5

дБ

Плотность мощности шума в полосе передачи

Без дополнительного фильтра С дополнительным фильтром

-50-120

дБм / 4 кГц дБм / 4 кГц

КУ-БАНД

ПАРАМЕТР

ПРИМЕЧАНИЯ

ПРЕДЕЛЫ

ЕДИНИЦ

Диапазон частот

(см. Варианты расширенного диапазона)

14.С 00 по 14,50

ГГц

Выходная мощность @: Psat / двухтональный PLINEAR (типовой / гарантированный минимум)

HPAKU3080AC_XXXX

Psat / PLinear 49,0 / 46,0 (80/40)

дБм (Вт)

Требования к питанию Линейное напряжение Линия Частота Линия питания

Коэффициент мощности

, скорректированный HPAKU3080AC_XXXX @ Psat HPAKU3080AC_XXXX @ PLinear

от 90 до 265 от 47 до 63 730 585

В переменного тока Гц Вт Вт

ПАРАМЕТР

ПРИМЕЧАНИЯ

ПРЕДЕЛЫ

ЕДИНИЦ

Равномерность усиления Кривая изменения коэффициента усиления по сравнению сТемп. Регулировка усиления

Полнодиапазонный диапазон

(диапазоны C, X, Ku), полный диапазон (расширенный диапазон C, расширенный диапазон Ku) на 40 МГц (диапазоны C, X, Ku) от -40 ° C до +55 ° C Разрешение 0,1 дБ

55-75 ± 1,0 ± 1,5 ± 0,3 ± 1,5 20

дБ дБ дБ дБ / 40 МГц дБ дБ

Интермодуляционные искажения

с рейтингом PLinear

-25

дБн

AM / PM Преобразование

с рейтингом PLinear

2.0

o / дБ

Паразитные (только SSPA) Гармоники (только SSPA)

с рейтингом PLinear

-60-50

дБн дБн

Вход / выход VSWR

Все устройства, кроме устройств с расширенным диапазоном C Расширенный диапазон C

1.30: 1 1,50: 1

Уровень шума

При максимальном усилении (диапазоны C, X, Ku)

10

дБ

Групповая задержка (на сегмент 40 МГц)

Линейная параболическая пульсация

0.01 0,003 1,0

нс / МГц нс / МГц 2 нс (размах)

Плотность выходной мощности шума в полосе передачи

Tx Band Rx Band (C-, X-, Ku-диапазоны)

-75 -150

дБВт / 4 кГц дБВт / 4 кГц

Остаточный АМ шум

0-10 кГц 10 кГц — 500 кГц 500 кГц — 1 МГц

-45-20 (1.25 + журнал F) -80

дБн дБн дБн

Фазовый шум (только SSPA)

Частота смещения от несущей 10 Гц 100 Гц 1 кГц 10 кГц 100 кГц 1 МГц

-90-100-110-120-125-130

дБн / Гц дБн / Гц дБн / Гц дБн / Гц дБн / Гц дБн / Гц

RF Детектор мощности

От

Psat до (Psat — 20 дБм)

20 ± 1.0

дБм

Flyaway и переносные антенны VSAT, портативные спутниковые системы, связь в движении (COTM), морская связь

Wavestream Corporation представляет 80-ваттный блочный повышающий преобразователь со спичечным коробом в Ku-диапазоне, идеально подходящий для служб спутникового сбора новостей

СИНГАПУР, 13 июня 2008 г. (ПРАЙМ НОВОСТЕЙ) — Wavestream Corporation (www.wavestream.com), производитель компактных, высокоэффективных твердотельных усилителей мощности, сегодня объявил, что он продемонстрирует на CommunicAsia свой новый 80-ваттный Ku-Band Matchbox Block Upconverter (BUC) для различных коммерческих и военных приложений спутниковой связи. , 17-20 июня 2008 г. на стенде 6J1-01 на выставке Singapore Expo в Сингапуре. Ku BUC мощностью 80 Вт — это высокоэффективный твердотельный усилитель мощности (SSPA), который идеально подходит для приложений спутникового сбора новостей (SNG), например, тех, которые обсуждаются на CommunicAsia.

Используя технологии Spatial Power Advantage ™ компании Wavestream, компания смогла упаковать 80 Вт выходной мощности при сжатии 1 дБ в прочный 25-фунтовый блок, который можно установить непосредственно на коромысле антенн со средней апертурой, максимально увеличив мощность при сжатии. кормления и дальнейшего повышения эффективности на уровне системы. Компактный BUC размером всего 15 x 8 x 5 дюймов обеспечивает достаточную линейную мощность для сбора большинства спутниковых новостей высокого разрешения. Как и другие блоки BUC серии Matchbox от Wavestream, новый 80-ваттный BUC Ku-диапазона обеспечивает максимальную линейную мощность. на фунт на единицу объема в универсальном, простом в использовании решении.

«Поскольку грузовики спутниковых новостей становятся все меньше, и многие новостные агентства ищут способы быстро отправить нескольких репортеров со своим собственным оборудованием на главные новостные сцены, мы считаем, что рынок СНГ с радостью примет наш 80-ваттный BUC», — сказал он. сказал Крис Бранскум, генеральный директор Wavestream. «Учитывая его компактный размер и преимущества, включая потребляемую мощность менее 600 Вт переменного тока, что значительно ниже, чем у других SSPA, а также режим мягкого отказа и постепенное снижение производительности, наш новый 80-ваттный BUC готов заменить TWTA, особенно в средах SNG. .Кроме того, его характеристики высокой эффективности и надежности делают 80-ваттный BUC Wavestream хорошо подходящим для растущего числа военных приложений в Ku-диапазоне ».

80-ваттный BUC Wavestream обеспечивает высокую надежность и минимизирует затраты на жизненный цикл даже в самых требовательных приложениях и экстремальных условиях. Кроме того, BUC включает в себя выбор частотных диапазонов (14,0 — 14,5 ГГц или 13,75 — 14,5 ГГц) без снижения производительности, преобразование с повышением частоты из L-диапазона в Ku-диапазон, мониторинг и управление последовательным интерфейсом или Ethernet, регулируемое затухание и мониторинг выходной мощности.

О корпорации Wavestream

Wavestream разрабатывает и производит мощные твердотельные усилители, отвечающие требованиям современных систем связи и датчиков. Технология Wavestream Spatial Power Advantage ™, революционная технология пространственного объединения мощности, обеспечивает более высокую выходную мощность усилителя в меньших корпусах с большей эффективностью и меньшей стоимостью, чем это было возможно ранее. В настоящее время Wavestream предлагает лучшие в отрасли SSPA и BUC для Ka- и Ku-диапазонов для спутниковой связи.Компания Wavestream предлагает твердотельные решения для коммерческих систем, систем обороны и внутренней безопасности, требующих мощности, эффективности и стоимости с помощью Spatial Power Advantage ™.

Для получения дополнительной информации посетите веб-сайт компании www.wavestream.com.

          

Анти-Ku протеин [INCA-X] | Абсолютное антитело

Инвентарный номер целевого белка UniProt: P12956, P13010

Альтернативное название цели: Ku70; Ку 80; Ку70 / 80; XRCC5; XRCC6; Ku гетеродимер; Перекрестно комплементарный белок 5, восстанавливающий рентгеновские лучи; Перекрестно комплементарный белок 6, восстанавливающий рентгеновские лучи; Субъединица Ku антигена 70 кДа; 5′-дезоксирибозо-5-фосфатлиаза Ku70; 5′-dRP-лиаза Ku70; АТФ-зависимая ДНК-геликаза 2 субъединица 1; АТФ-зависимая ДНК-геликаза II, субъединица 70 кДа; CTC-бокс-связывающий фактор субъединица 75 кДа; CTC75; CTCBF; Аутоантигенный белок р70 волчанки Ku; Аутоантиген щитовидной железы; TLAA; Субъединица Ku антигена 86 кДа; АТФ-зависимая ДНК-геликаза 2 субъединица 2; АТФ-зависимая ДНК-геликаза II, субъединица 80 кДа; CTC-бокс-связывающий фактор субъединица 85 кДа; CTC85; Аутоантигенный белок р86 волчанки Ku; Ядерный фактор IV
Иммуноген: Исходное антитело было выделено из библиотеки наивных фаговых антител n-CoDeR®.Первую вычитание проводили путем инкубации с линией клеток Т-клеточного лейкоза MOLT-4. Селекцию проводили на клеточной линии аденокарциномы поджелудочной железы PL45 в течение 1 ч инкубации при 37 ° C, что позволило интернализовать комплексы scFv-рецептор фага. Интернализованные фаги извлекали лизированием клеток с удаленной поверхностью 100 мМ триэтиламина.

Специфичность: Это антитело распознает и связывает гетеродимер Ku-белка (Ku70 / 80), ядерный белок, который также присутствует на поверхности некоторых опухолевых клеток.

Примечания по применению: белок Ku представляет собой гетеродимер из 2 тесно связанных субъединиц, называемых Ku70 и Ku80, обычно расположенных в ядре, где он участвует в процессах негомологичного соединения концов, что отвечает за репарацию двухцепочечной ДНК. перерывы. Опосредованный рецепторами эндоцитоз Ku70 / 80 является быстрым (t1 / 2 12 мин) и обширным (90% пула рецепторов внутри клетки через 100 мин), как измерено с помощью радиоиммуноанализа с вращением. Ku70 / 80 также успешно использовался в качестве порта входа цитотоксической нагрузки в опухолевые клетки различного происхождения.INCA-X распознает и связывает гетеродимер Ku-белка. Специфичность связывания INCA-X с Ku70 / 80 подтверждена иммунопреципитацией и проточной цитометрией. Это антитело способно к интернализации и может использоваться в иммунотерапии. Интернализация INCA-X в клетках карциномы поджелудочной железы была подтверждена с помощью конфокальной микроскопии. Поглощение, интернализацию и удержание этого антитела изучали с помощью вращающегося радиоиммуноанализа. Клетки карциномы обрабатывали INCA-X и затем инкубировали с антителом против человеческого IgG, конъюгированным с сапориновым токсином (Hum-ZAP), для определения клеточной цитотоксичности, опосредованной иммунотоксином.Интернализация токсина была успешной и привела к гибели Ku70 / 80-положительных клеточных линий карциномы (PMID: 16